| 目录 | 第1-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| Standard Abbreviations | 第11-13页 |
| 前言 | 第13-26页 |
| 一、IgA生物学 | 第14-17页 |
| 1、IgA的生物合成与代谢 | 第14-15页 |
| 2、IgA的结构 | 第15-16页 |
| 3、IgA的生物学功能 | 第16-17页 |
| 二、IgA的Fc受体 | 第17-25页 |
| 1、Fcα/μR的分布和表达调控 | 第18-19页 |
| 2、Fcα/μR的基因结构 | 第19-21页 |
| 3、Fcα/μR的蛋白质结构 | 第21页 |
| 4、Fcα/μR与IgA、IgM的结合 | 第21-23页 |
| 5、Fcα/μR的信号转导 | 第23页 |
| 6、Fcα/μR介导的生理学功能 | 第23-25页 |
| 三、本论文的研究目标 | 第25-26页 |
| 第一部分:抗人Fcα/μR和pIgR单克隆抗体的制备、纯化与鉴定 | 第26-91页 |
| 一、实验材料 | 第26-36页 |
| 1.细胞系 | 第26-27页 |
| 2.菌株、质粒载体和cDNA克隆 | 第27页 |
| 3.实验动物 | 第27页 |
| 4.主要化学试剂 | 第27-28页 |
| 5.主要抗体 | 第28-29页 |
| 6.工具酶、分子量标准及试剂盒 | 第29页 |
| 7.仪器设备 | 第29-30页 |
| 8.溶液配制 | 第30-36页 |
| 二、实验方法 | 第36-73页 |
| 1.分子生物学常规实验操作 | 第36-40页 |
| 2.目的蛋白的原核表达和纯化 | 第40-49页 |
| 3.单克隆抗体的制备、筛选和保藏 | 第49-60页 |
| 4.原核蛋白的复性重折叠 | 第60-64页 |
| 5.Fcα/μR的真核细胞表达 | 第64-66页 |
| 6.蛋白质的标记和交联 | 第66-72页 |
| 7.IgA、IgM、sIgA的分离和纯化 | 第72-73页 |
| 三、实验结果 | 第73-89页 |
| 1.人Fcα/μR膜外区的原核表达 | 第74-77页 |
| 2.抗-Fcα/μR的单克隆抗体的制备和筛选 | 第77-80页 |
| 3.人Fcα/μR的真核细胞表达 | 第80-83页 |
| 4.人pIgR膜外区的原核表达、复性和抗pIgR的抗体筛选 | 第83-87页 |
| 5.人血清IgA的分离纯化 | 第87-89页 |
| 四、讨论 | 第89-91页 |
| 第二部分:Fcα/μR和pIgR在多种组织器官的表达比较 | 第91-118页 |
| 一、实验材料 | 第91-94页 |
| 1.主要抗体 | 第91页 |
| 2.仪器设备 | 第91页 |
| 3.主要溶液配制 | 第91-92页 |
| 4.多种正常器官组织芯片 | 第92-94页 |
| 二、实验方法 | 第94-97页 |
| 1.免疫组织化学实验 | 第94-96页 |
| 2.石蜡切片的免疫荧光实验 | 第96-97页 |
| 三、实验结果 | 第97-112页 |
| 1.消化道:胃——小肠——阑尾——结肠——直肠 | 第97-101页 |
| 2.淋巴组织:脾和扁桃体 | 第101-102页 |
| 3.肝胆组织 | 第102-105页 |
| 4.肺组织 | 第105-106页 |
| 5.肾组织 | 第106-107页 |
| 6.乳腺组织 | 第107-109页 |
| 7.睾丸组织、前列腺组织 | 第109-110页 |
| 8.脑组织 | 第110页 |
| 9.心剧组织 | 第110页 |
| 10.消化道Fcα/μR阳性细胞的其它抗体染色 | 第110-112页 |
| 四、讨论 | 第112-118页 |
| 1.基于核酸序列的Fcα/μR和pIgR电子表达谱分析 | 第112-113页 |
| 2.基于蛋白序列和单抗的Fcα/μR和pIgR组织表达谱分析 | 第113-116页 |
| 3.基于组织表达谱的Fcα/μR功能初探 | 第116-118页 |
| 第三部分:Fcα/μR在肾细胞上的表达和在IgA肾病中的作用 | 第118-140页 |
| 一、实验材料 | 第119-122页 |
| 1.IgA肾病及对照组病人资料 | 第119-121页 |
| 2.IgA肾病病理组织切片 | 第121页 |
| 3.细胞株 | 第121-122页 |
| 4.抗体 | 第122页 |
| 二、实验方法 | 第122-126页 |
| 1.HK-2细胞上不同IgA受体的RT-PCR | 第122-123页 |
| 2.HMC,HMCL,HK-2和PTEC细胞上Fcα/μR的表达分析 | 第123页 |
| 3.肾组织的免疫组织化学分析和免疫荧光双标实验 | 第123-124页 |
| 4.HK-2和PTEC细胞结合IgA | 第124页 |
| 5.HK-2细胞吞噬IgA2、IgM和IgG3免疫复合物 | 第124-125页 |
| 6.IgA病人血清或血清IgA细胞孵育实验 | 第125-126页 |
| 7.统计学分析 | 第126页 |
| 三、实验结果 | 第126-137页 |
| 1.HK-2细胞上不同IgA受体的RT-PCR | 第126页 |
| 2.HMC,HMCL,HK-2和PTEC细胞上Fcα/μR的表达分析 | 第126-129页 |
| 4.表达在HK-2细胞上的Fcα/μR为功能性IgA受体 | 第129-135页 |
| 5.Fcα/μR和IgA在IgAN组织上的共定位分析 | 第135-136页 |
| 6.IgAN病人的血清IgA可以上调HK-2细胞上的Fcα/μR表达 | 第136-137页 |
| 四、讨论 | 第137-140页 |
| 综述:中性粒细胞上的Fc受体 | 第140-159页 |
| 1.中性粒细胞膜上各种FcR的基本结构、分布和基因异质性 | 第141-148页 |
| ·FcγRⅠ(CD64) | 第141-142页 |
| ·FcγRⅡ(CD32) | 第142-143页 |
| ·FcγRⅢ(CD16) | 第143-144页 |
| ·FcγR subunits | 第144页 |
| ·FcαR(CD89) | 第144-148页 |
| 2.FcR的晶体结构和功能部位 | 第148-154页 |
| ·FcγR与IgG的结合 | 第148-153页 |
| ·FcαRⅠ与IgA的结合 | 第153-154页 |
| 3.FcR介导的细胞信号转导 | 第154-157页 |
| ·FcR在细胞表面的聚集 | 第154-155页 |
| ·FcR迁入细胞膜上的特殊区域——脂阀(lipid raft) | 第155-156页 |
| ·活化后细胞膜酪氨酸的磷酸化 | 第156-157页 |
| 4.FcR介导的细胞生物功能 | 第157-159页 |
| 参考文献 | 第159-171页 |
| 附录1 攻读博士学位期间发表的文章情况 | 第171-172页 |
| 附录2 质粒载体图谱和多克隆位点 | 第172-176页 |
| 致谢 | 第176页 |
