| 中文摘要 | 第1-15页 |
| ABSTRACT | 第15-17页 |
| 英文缩略词及中文对照表 | 第17-18页 |
| 第一章 文献综述 | 第18-51页 |
| 引言 | 第18-19页 |
| 纤维素与纤维素酶的概述 | 第19-47页 |
| 1. 纤维素资源与纤维素科学 | 第19-23页 |
| ·纤维素结构特点和分子构象 | 第19-23页 |
| ·纤维素的降解 | 第23页 |
| 2. 纤维素酶研究进展 | 第23-47页 |
| ·纤维素酶系组成及催化机制 | 第23-26页 |
| ·纤维素酶的分子结构和性质 | 第26-28页 |
| ·纤维素酶的分子量 | 第28-29页 |
| ·产纤维素酶微生物 | 第29-32页 |
| ·纤维素酶基因克隆 | 第32-40页 |
| ·纤维素酶在原核生物中的表达 | 第40-41页 |
| ·纤维素酶在真核生物中的表达 | 第41-44页 |
| ·纤维素酶的应用 | 第44-47页 |
| 本研究的目的和内容 | 第47-51页 |
| 1 研究目的和意义 | 第47-48页 |
| 2 研究内容 | 第48页 |
| 3 技术路线 | 第48-51页 |
| 第二章 嗜热真菌热稳定纤维素酶的分离纯化 | 第51-98页 |
| 第一节 嗜热毛壳菌（Chaetomium thermophilum CT2）两种外切葡聚糖纤维二糖水解酶的纯化与特性研究 | 第51-72页 |
| 1. 材料和方法 | 第52-59页 |
| ·菌株与培养基 | 第52-53页 |
| ·实验方法 | 第53-59页 |
| ·培养条件 | 第53页 |
| ·酶活性测定 | 第53-54页 |
| ·外切葡聚糖纤维二糖水解酶CBH 的分离纯化 | 第54-55页 |
| ·蛋白质含量测定 | 第55-56页 |
| ·蛋白质纯度鉴定 | 第56-57页 |
| ·蛋白质分子量的测定 | 第57页 |
| ·外切葡聚糖纤维二糖水解酶（CBH）性质的研究 | 第57-59页 |
| ·外切葡聚糖纤维二糖水解酶的反应动力学曲线 | 第59页 |
| 2. 结果与分析 | 第59-72页 |
| ·不同培养时间对生产外切葡聚糖纤维二糖水解酶CBH 的影响 | 第59-60页 |
| ·C. thermophilum CT2 外切葡聚糖纤维二糖水解酶CBHⅠ的分离纯化及鉴定 | 第60-62页 |
| ·DEAE-Sepharose Fast Flow 阴离子交换柱层析 | 第60页 |
| ·Sephacryl S-100 分子筛层析 | 第60-61页 |
| ·DEAE -Sephorase Q Fast Flow 强阴离子交换柱层析 | 第61-62页 |
| ·外切葡聚糖纤维二糖水解酶CBHⅠ纯化过程总表 | 第62页 |
| ·外切葡聚糖纤维二糖水解酶CBHⅠ的一般性质 | 第62-67页 |
| ·外切葡聚糖纤维二糖水解酶CBHⅠ的分子量 | 第62-63页 |
| ·外切葡聚糖纤维二糖水解酶CBHⅠ的最适反应温度 | 第63-64页 |
| ·外切葡聚糖纤维二糖水解酶CBHⅠ的最适反应pH 值 | 第64-65页 |
| ·外切葡聚糖纤维二糖水解酶CBHⅠ的热稳定性 | 第65页 |
| ·外切葡聚糖纤维二糖水解酶CBHⅠ的pH 稳定性 | 第65-66页 |
| ·外切葡聚糖纤维二糖水解酶CBHⅠ的底物特异性 | 第66页 |
| ·外切葡聚糖纤维二糖水解酶CBHⅠ的反应动力学曲线 | 第66-67页 |
| ·C.t hermophilum CT2 外切葡聚糖纤维二糖水解酶CBHⅡ的分离纯化及鉴定 | 第67-69页 |
| ·DEAE -Sephorase Q Fast Flow 强阴离子交换柱层析 | 第67-68页 |
| ·外切葡聚糖纤维二糖水解酶CBHⅡ纯化过程总表 | 第68-69页 |
| ·外切葡聚糖纤维二糖水解酶CBHⅡ的一般性质 | 第69-72页 |
| ·外切葡聚糖纤维二糖水解酶CBHⅡ的分子量 | 第69页 |
| ·外切葡聚糖纤维二糖水解酶CBHⅡ的最适反应温度 | 第69-70页 |
| ·外切葡聚糖纤维二糖水解酶CBHⅡ的最适反应pH 值 | 第70-71页 |
| ·外切葡聚糖纤维二糖水解酶CBHⅡ的热稳定性 | 第71页 |
| ·外切葡聚糖纤维二糖水解酶CBHⅡ的pH 稳定性 | 第71-72页 |
| 第二节 嗜热毛壳菌（Chaetomium thermophilum CT2）β-葡萄糖苷酶的纯化与特性研究 | 第72-76页 |
| 1. 材料和方法 | 第72-73页 |
| 2. 酶的纯化 | 第73页 |
| 3. 酶的一般性质 | 第73-76页 |
| 第三节 埃默森篮状菌(Talaromyces emersonii)外切葡聚糖纤维二糖水解酶的分离纯化 | 第76-89页 |
| 1. 材料和方法 | 第76-79页 |
| ·菌株与培养基 | 第76-77页 |
| ·实验方法 | 第77-79页 |
| ·培养条件 | 第77页 |
| ·酶活性测定 | 第77页 |
| ·外切葡聚糖纤维二糖水解酶CBH 的分离纯化 | 第77-78页 |
| ·蛋白质含量测定 | 第78页 |
| ·蛋白质纯度鉴定 | 第78页 |
| ·蛋白质分子量的测定 | 第78-79页 |
| 2. 结果与分析 | 第79-89页 |
| ·不同培养时间对生产外切葡聚糖纤维二糖水解酶CBH 的影响 | 第79页 |
| ·T. emersonii 外切葡聚糖纤维二糖水解酶CBH 的分离纯化及鉴定 | 第79-82页 |
| ·DEAE-Sepharose Fast Flow 阴离子交换柱层析 | 第79-80页 |
| ·Sephacryl S-100 分子筛层析 | 第80-82页 |
| ·外切葡聚糖纤维二糖水解酶CBH 纯化过程总表 | 第82页 |
| ·外切葡聚糖纤维二糖水解酶CBH 的一般性质 | 第82-89页 |
| ·外切葡聚糖纤维二糖水解酶CBH 的分子量 | 第82-83页 |
| ·外切葡聚糖纤维二糖水解酶CBH 的最适反应温度 | 第83-84页 |
| ·外切葡聚糖纤维二糖水解酶CBH 的最适反应pH 值 | 第84-85页 |
| ·外切葡聚糖纤维二糖水解酶CBH 的热稳定性 | 第85-86页 |
| ·外切葡聚糖纤维二糖水解酶的pH 稳定性 | 第86-87页 |
| ·外切葡聚糖纤维二糖水解酶的底物特异性 | 第87页 |
| ·外切葡聚糖纤维二糖水解酶的反应动力学曲线 | 第87-89页 |
| 讨论 | 第89-98页 |
| 1. 小结 | 第89-91页 |
| 2. 讨论 | 第91-98页 |
| ·研究结果 | 第91-93页 |
| ·研究方案 | 第93-96页 |
| ·后续工作的展望与建议 | 第96-98页 |
| 第三章 嗜热毛壳菌热稳定外切葡聚糖纤维二糖水解酶基因的克隆及序列分析 | 第98-155页 |
| 第一节 嗜热毛壳菌热稳定外切葡聚糖纤维二糖水解酶基因的cDNA 克隆 | 第98-141页 |
| 1. 材料和方法 | 第99-115页 |
| ·材料 | 第99-100页 |
| ·供试菌株 | 第99页 |
| ·菌株与质粒 | 第99页 |
| ·酶和生化试剂 | 第99页 |
| ·仪器 | 第99页 |
| ·溶液及培养基配制 | 第99-100页 |
| ·嗜热毛壳菌外切葡聚糖纤维二糖水解酶基因的cDNA 克隆 | 第100-115页 |
| ·PCR 引物 | 第100-101页 |
| ·总RNA 的提取（Trizol 法） | 第101-102页 |
| ·反转录cDNA 第一链的合成 | 第102-103页 |
| ·目的基因3’末端的分离（3’-RACE） | 第103-110页 |
| ·目的基因cDNA 中间片段的分离 | 第110页 |
| ·目的基因5’末端的分离（5’-RACE） | 第110-115页 |
| ·目的基因全长cDNA 的克隆 | 第115页 |
| ·全长序列的生物信息学分析 | 第115页 |
| 2 结果 | 第115-141页 |
| ·Chaetomium thermophilumCT2 总RNA 的提取 | 第115-116页 |
| ·C. thermophilum CT2 外切葡聚糖纤维二糖水解酶cbh3 基因3’-末端cDNA 的分离 | 第116-117页 |
| ·C. thermophilum CT2 外切葡聚糖纤维二糖水解酶cbh3 基因中间片段的分离 | 第117-120页 |
| ·C. thermophilum CT2 外切葡聚糖纤维二糖水解酶cbh3 基因cDNA 5’-末端的分离 | 第120-122页 |
| ·C. thermophilum CT2 外切葡聚糖纤维二糖水解酶cbh3 基因ORF 全长cDNA 的分离及扩增片段的序列拼接 | 第122-123页 |
| ·外切葡聚糖纤维二糖水解酶cbh3 基因的核苷酸序列和氨基酸序列分析 | 第123-141页 |
| ·外切葡聚糖纤维二糖水解酶基因cbh3 的核苷酸序列分析 | 第123-127页 |
| ·外切葡聚糖纤维二糖水解酶基因cbh3 的氨基酸序列分析 | 第127-135页 |
| ·外切葡聚糖纤维二糖水解酶氨基酸组成 | 第135-137页 |
| ·外切葡聚糖纤维二糖水解酶的结构预测 | 第137-141页 |
| ·外切葡聚糖纤维二糖水解酶的跨膜区预测 | 第137页 |
| ·外切葡聚糖纤维二糖水解酶的二级结构预测 | 第137-141页 |
| 第二节 嗜热毛壳菌CT2 热稳定外切葡聚糖纤维二糖水解酶基因的DNA 克隆及序列分析 | 第141-148页 |
| 1 材料和方法 | 第141-144页 |
| ·材料 | 第141-142页 |
| ·供试菌株 | 第141页 |
| ·菌株与质粒 | 第141页 |
| ·酶和生化试剂 | 第141-142页 |
| ·仪器 | 第142页 |
| ·溶液及培养基配制 | 第142-143页 |
| ·培养基 | 第142页 |
| ·溶液配制 | 第142-143页 |
| ·Chaetomium thermophilum CT2 菌丝体DNA 的抽提 | 第143页 |
| ·外切葡聚糖纤维二糖水解酶基因genomic DNA PCR 扩增 | 第143-144页 |
| ·外切葡聚糖纤维二糖水解酶基因的DNA 序列分析 | 第144页 |
| 2 结果与分析 | 第144-148页 |
| 讨论 | 第148-155页 |
| 1. 研究小结 | 第148-149页 |
| 2. 基因分离技术 | 第149-154页 |
| ·菌丝总RNA 的提取 | 第149-150页 |
| ·PCR 引物设计 | 第150-152页 |
| ·RACE 技术分离基因 | 第152-154页 |
| 3. 后续工作的展望与建议 | 第154-155页 |
| 第四章 嗜热毛壳菌CT2 热稳定外切葡聚糖纤维二糖水解酶基因在毕赤酵母中的表达 | 第155-190页 |
| 1. 材料和方法 | 第156-168页 |
| ·材料 | 第156-158页 |
| ·菌株和质粒 | 第156页 |
| ·酶和生化试剂 | 第156页 |
| ·培养基及有关溶液的配制 | 第156-158页 |
| ·主要仪器设备 | 第158页 |
| ·试验方法 | 第158-168页 |
| ·外切葡聚糖纤维二糖水解酶CBH 成熟肽基因序列的分离 | 第158-159页 |
| ·酵母表达载体的构建 | 第159-160页 |
| ·线性化质粒DNA 制备 | 第160-161页 |
| ·酵母转化 | 第161-163页 |
| ·酵母转化子的筛选与鉴定 | 第163-166页 |
| ·酵母工程菌的培养和外切葡聚糖纤维二糖水解酶的诱导分泌表达 | 第166-168页 |
| ·外切葡聚糖纤维二糖水解酶工程菌表达产物的酶学性质 | 第168页 |
| 2 结果与分析 | 第168-181页 |
| ·外切葡聚糖纤维二糖水解酶CBH 成熟肽基因序列的限制性酶切位点分析结果 | 第168-170页 |
| ·外切葡聚糖纤维二糖水解酶CBH 基因成熟肽的PCR 扩增分离 | 第170-171页 |
| ·外切葡聚糖纤维二糖水解酶基因cbh 在毕赤酵母中的表达 | 第171-181页 |
| ·酵母表达载体的构建和鉴定 | 第171-175页 |
| ·重组酵母表达质粒pPIC9K/cbh 转化 Pichia pastoris GS115 及酵母转化子的筛选 | 第175-177页 |
| ·嗜热毛壳菌外切葡聚糖纤维二糖水解酶cbh基因在Pichia pastoris中的高效表达及表达产物的检测 | 第177-179页 |
| ·外切葡聚糖纤维二糖水解酶酵母工程菌的遗传稳定性分析 | 第179页 |
| ·表达外切葡聚糖纤维二糖水解酶的酶学性质研究 | 第179-181页 |
| 讨论 | 第181-190页 |
| 1 研究小结 | 第181-182页 |
| 2 表达重组外切葡聚糖纤维二糖水解酶的Pichia pastoris 表达系统评析 | 第182-188页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统高效表达重组外切葡聚糖纤维二糖水解酶的优势 | 第182-184页 |
| ·影响Pichia pastoris 表达系统表达重组纤维二糖水解酶的因素 | 第184-187页 |
| ·摇瓶培养与发酵罐培养 | 第187-188页 |
| 3 后续工作展望与建议 | 第188-190页 |
| 第五章 全文结论 | 第190-192页 |
| 参考文献 | 第192-213页 |
| 致谢 | 第213-214页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第214页 |
