| 中文摘要 | 第1-4页 |
| 英文摘要 | 第4-9页 |
| 前言 | 第9-11页 |
| 第一部分 文献综述 | 第11-24页 |
| 1 猪伪狂犬病 | 第11-13页 |
| ·疾病概述 | 第11页 |
| ·伪狂犬病在我国的流行情况 | 第11-12页 |
| ·伪狂犬病病毒GE基因及其在鉴别诊断中的作用 | 第12-13页 |
| 2 猪繁殖与呼吸道综合征 | 第13-17页 |
| ·疾病概述 | 第13-14页 |
| ·PRRS在我国的流行情况 | 第14-15页 |
| ·PRRSV M基因概述 | 第15-17页 |
| 3 猪流行性日本乙型脑炎 | 第17-18页 |
| ·疾病概述及国内外流行情况 | 第17-18页 |
| ·JEVNS1基因概述 | 第18页 |
| 4 猪圆环病毒病 | 第18-19页 |
| ·疾病概述 | 第18页 |
| ·PCV2在我国的流行情况 | 第18-19页 |
| ·PCV2 ORF2概述 | 第19页 |
| 5 猪细小病毒病 | 第19-20页 |
| ·猪细小病毒病及其在我国的流行情况 | 第19-20页 |
| ·NS1基因作为引物设计基因的选择 | 第20页 |
| 6 猪繁殖障碍性疾病诊断方法 | 第20-24页 |
| ·病原分离鉴定 | 第20-21页 |
| ·血清学诊断方法 | 第21-22页 |
| ·分子生物学检测方法 | 第22-24页 |
| 第二部分 实验部分 | 第24-55页 |
| 1 材料 | 第24页 |
| ·病毒及病料 | 第24页 |
| ·细胞、菌株和质粒 | 第24页 |
| ·病毒核酸抽提试剂 | 第24页 |
| ·PCR及相关试剂 | 第24页 |
| ·主要仪器 | 第24页 |
| 2 方法 | 第24-38页 |
| ·病毒增殖 | 第24-25页 |
| ·病毒核酸抽提(RNA和DNA病毒分别抽提核酸) | 第25-26页 |
| ·病毒DNA的抽提 | 第25-26页 |
| ·病毒RNA的抽提 | 第26页 |
| ·引物设计 | 第26-30页 |
| ·PPV不同分离株间NS1基因同源性分析 | 第26-27页 |
| ·JEV不同分离株间NS1基因同源性分析 | 第27页 |
| ·PRRSV不同分离株间M基因同源性分析 | 第27-28页 |
| ·PRV不同分离株间gE基因同源性分析 | 第28-29页 |
| ·PCV2不同分离株间ORF2同源性分析 | 第29页 |
| ·多联PCR引物设计 | 第29-30页 |
| ·单项PCR检测方法的建立 | 第30-34页 |
| ·单项PCR检测JEV和PRRSV | 第30-31页 |
| ·单项PCR检测PPV,PCV2,PRV | 第31页 |
| ·单项PCR条件优化 | 第31-32页 |
| ·PCR产物的鉴定 | 第32-34页 |
| ·多重PCR检测方法的建立 | 第34-37页 |
| ·PPV-JEV检测 | 第34-36页 |
| ·PCV2-PRRSV-PRV的检测 | 第36-37页 |
| ·敏感性检测 | 第37页 |
| ·单项PCR敏感性实验 | 第37页 |
| ·多联PCR敏感性实验 | 第37页 |
| ·特异性实验 | 第37-38页 |
| ·PPV-JEV二联PCR对单一模板的检测 | 第38页 |
| ·PCV2-PRRSV-PRV对单一模板和二联模版的检测 | 第38页 |
| ·可重复性实验 | 第38页 |
| ·对临床猪组织病料的检测 | 第38页 |
| 3 结果 | 第38-51页 |
| ·单项PCR反应条件的优化 | 第38-42页 |
| ·应用不同缓冲溶液扩增效果 | 第38-39页 |
| ·单项PCR共同退火温度的确定 | 第39页 |
| ·酶浓度的确定 | 第39-40页 |
| ·引物浓度的确定 | 第40-41页 |
| ·Mg~(2+)浓度的确定 | 第41-42页 |
| ·不同核酸抽提方法对PCV2的扩增效果比较 | 第42页 |
| ·PCR产物鉴定结果 | 第42-43页 |
| ·阳性质粒的PCR鉴定 | 第42-43页 |
| ·测序结果(见附录1) | 第43页 |
| ·多重PCR反应条件的确定 | 第43-46页 |
| ·PPV-JEV二联PCR反应条件的确定 | 第43-45页 |
| ·PCV2-PRRSV-PRV三联PCR反应条件的确定 | 第45-46页 |
| ·敏感性实验 | 第46-48页 |
| ·单项PCR敏感性实验 | 第46-47页 |
| ·多联PCR敏感性实验 | 第47-48页 |
| ·特异性实验 | 第48-49页 |
| ·PPV-JEV二联PCR对单一模板的检测结果 | 第48页 |
| ·PCV2-PRRSV-PRV对单一模板和二联模板的检测结果 | 第48-49页 |
| ·可重复性实验结果 | 第49页 |
| ·对临床猪组织病料的检测结果 | 第49-51页 |
| 4 讨论 | 第51-53页 |
| ·多重PCR的引物设计 | 第51-52页 |
| ·多重PCR反应条件的优化 | 第52-53页 |
| ·临床送检病料的选择 | 第53页 |
| ·DNA抽提方法的选择 | 第53页 |
| 5 结论 | 第53-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-65页 |
| 附录1 扩增片段测序结果 | 第65-68页 |
| 附录2 研究生期间发表论文 | 第68页 |
