| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩略语表 | 第11-12页 |
| 1. 文献综述 | 第12-34页 |
| ·镁离子螯合酶的研究概述 | 第12-15页 |
| ·镁离子螯合酶的酶学研究进展 | 第15-28页 |
| ·镁离子螯合酶各亚基的鉴定 | 第15-16页 |
| ·基因的鉴定、克隆与表达 | 第16-18页 |
| ·各亚基的结构与性质 | 第18-22页 |
| ·镁离子螯合酶催化模型的建立 | 第22-24页 |
| ·基因表达及活性的调控 | 第24-25页 |
| ·GUN4蛋白对镁离子螯合酶的作用 | 第25-28页 |
| ·镁离子螯合酶的其他功能 | 第28-32页 |
| ·在叶绿体细胞核反向信号途径的作用 | 第28-30页 |
| ·参与ABA信号途径 | 第30-31页 |
| ·H亚基是SigE的抗Sigma因子 | 第31-32页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第32-34页 |
| 2. 材料与方法 | 第34-46页 |
| ·材料与来源 | 第34页 |
| ·菌株 | 第34页 |
| ·基因和蛋白序列分析及引物设计 | 第34页 |
| ·基因克隆与载体构建 | 第34-35页 |
| ·RNA抽提和RT-PCR | 第34-35页 |
| ·表达载体构建 | 第35页 |
| ·蛋白研究方法 | 第35-40页 |
| ·原核表达与优化 | 第35-36页 |
| ·蛋白分离与纯化 | 第36-37页 |
| ·抗体的制备与纯化 | 第37页 |
| ·豌豆叶绿体及其可溶蛋白的提取 | 第37-38页 |
| ·利用凝胶过滤的蛋白分级 | 第38页 |
| ·豌豆H亚基的分离 | 第38-39页 |
| ·BN-PAGE，SDS-PAGE及Western blotting | 第39-40页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第40页 |
| ·镁离子螯合酶活性测定 | 第40-42页 |
| ·卟啉的配制与保存 | 第40页 |
| ·蛋白的复性 | 第40-41页 |
| ·自由镁离子的计算 | 第41页 |
| ·终止法测定酶活 | 第41页 |
| ·连续法测定酶活 | 第41-42页 |
| ·动力学分析 | 第42页 |
| ·光谱分析 | 第42-43页 |
| ·质谱分析 | 第43-46页 |
| 3. 结果与分析 | 第46-84页 |
| ·基因的克隆与序列分析 | 第46-48页 |
| ·各亚基及GUN4基因的克隆及载体构建 | 第46-47页 |
| ·镁离子螯合酶的序列分析 | 第47-48页 |
| ·蛋白的表达,纯化及抗体的制备 | 第48-57页 |
| ·各亚基及GUN4的原核表达及优化 | 第48-51页 |
| ·各亚基及GUN4的纯化 | 第51-54页 |
| ·抗体的制备,检测及纯化 | 第54-55页 |
| ·豌豆H亚基的分离及检测 | 第55-57页 |
| ·GUN4对镁离子螯合酶的功能研究 | 第57-73页 |
| ·GUN4增强镁离子螯合酶活性 | 第57-58页 |
| ·GUN4帮助H亚基结合Proto | 第58-66页 |
| ·GUN4与H亚基在体内形成稳定的复合物 | 第66-68页 |
| ·GUN4蛋白存在两种大小的分子量 | 第68-71页 |
| ·C端残基对于H亚基的激活是必须的 | 第71-73页 |
| ·镁离子螯合酶的动力学及催化机制研究 | 第73-84页 |
| ·底物ATP,Proto及Mg~(2+)动力学分析 | 第73-75页 |
| ·D亚基动力学分析 | 第75-76页 |
| ·I亚基动力学符合米氏方程 | 第76-77页 |
| ·H亚基存在正协同效应 | 第77-78页 |
| ·GUN4的动力学参数分析 | 第78-80页 |
| ·不同物种镁离子螯合酶的活性重组 | 第80-82页 |
| ·衣藻I_2亚基不能替代I_1亚基 | 第82-84页 |
| 4. 讨论 | 第84-90页 |
| ·GUN4调控植物镁离子螯合酶的活性 | 第84-86页 |
| ·植物镁离子螯合酶的催化机制 | 第86-88页 |
| ·镁离子螯合酶的研究展望 | 第88-89页 |
| ·镁离子螯合酶在水稻分子育种中的利用 | 第89-90页 |
| 参考文献 | 第90-104页 |
| 附录 | 第104-122页 |
| 附录 A Protocols | 第104-120页 |
| 附录 B 简历 | 第120-122页 |
| 致谢 | 第122页 |