| 中文摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-35页 |
| ·固氮酶的生物化学和生物物理学 | 第11-23页 |
| ·固氮酶的结构组成 | 第11-18页 |
| ·Fe 蛋白 | 第12-13页 |
| ·MoFe 蛋白 | 第13-14页 |
| ·铁钼辅因子(FeMoco ) | 第14-15页 |
| ·P-cluster | 第15-16页 |
| ·固氮酶的多样性 | 第16-18页 |
| ·固氮酶的特性 | 第18-21页 |
| ·固氮酶的稳定性与异种两组分的交叉互补性 | 第18页 |
| ·底物的还原特性 | 第18-20页 |
| ·金属簇的波谱及生化特性 | 第20-21页 |
| ·固氮酶的活性调节 | 第21-23页 |
| ·氨和化合态氮对固氮酶活性的影响 | 第21-22页 |
| ·ATP 和ADP | 第22页 |
| ·氧的作用 | 第22页 |
| ·分子伴侣GroEL 蛋白的作用 | 第22-23页 |
| ·固氮酶的分子生物学 | 第23-28页 |
| ·固氮酶基因 | 第23-25页 |
| ·突变株固氮酶蛋白的研究 | 第25-28页 |
| ·FeMoco 合成或活性受到影响的突变株 | 第25-27页 |
| ·P-cluster 特性异常的突变株 | 第27-28页 |
| ·MoFe 蛋白的晶体生长研究 | 第28-30页 |
| ·固氮酶的纯化 | 第30-33页 |
| ·常用的主要纯化方法 | 第31-32页 |
| ·柱层析法 | 第31页 |
| ·超滤结晶纯化 | 第31页 |
| ·亲和层析纯化 | 第31-32页 |
| ·厌氧制备电泳 | 第32页 |
| ·几种纯化方法的比较 | 第32-33页 |
| ·选题依据及其研究背景 | 第33-35页 |
| 第二章 材料与方法 | 第35-49页 |
| ·固氮菌的培养 | 第35-36页 |
| ·培养基的配制 | 第35页 |
| ·菌体培养 | 第35-36页 |
| ·固氮酶的纯化 | 第36-41页 |
| ·厌氧技术 | 第36-37页 |
| ·氩气中微量氧的去除 | 第36页 |
| ·厌氧操作要点 | 第36-37页 |
| ·固氮酶的分离纯化 | 第37-41页 |
| ·不同盐浓度的厌氧 Tris-HCl 缓冲液的配制 | 第37页 |
| ·野生种固氮酶MoFe 蛋白(OP Av1)的分离纯化 | 第37-39页 |
| ·DJ194 固氮酶MoFe 蛋白(ΔnifZ Av1)的分离纯化 | 第39-40页 |
| ·固氮酶Fe 蛋白(Av2)的分离纯化 | 第40-41页 |
| ·蛋白质浓度及活性测定 | 第41-43页 |
| ·用双缩脲法测定蛋白浓度 | 第41-42页 |
| ·试剂配制 | 第41页 |
| ·标准曲线制作 | 第41页 |
| ·样品蛋白浓度的测定 | 第41-42页 |
| ·固氮酶活性测定 | 第42-43页 |
| ·Mg-ATP 发生系统的配制 | 第42页 |
| ·C_2H_2还原和放氢活性测定 | 第42-43页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫反应 | 第43-46页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第43-45页 |
| ·变性凝胶电泳——SDS-PAGE | 第43-44页 |
| ·厌氧天然凝胶电泳——anoxic native electrophoresis | 第44页 |
| ·凝胶成像与扫描 | 第44-45页 |
| ·免疫印渍(Western blotting ) | 第45-46页 |
| ·试剂配制 | 第45页 |
| ·电印渍 | 第45-46页 |
| ·免疫酶标检测 | 第46页 |
| ·波谱分析 | 第46-47页 |
| ·质谱测定 | 第46页 |
| ·圆二色谱测定 | 第46页 |
| ·电子顺磁共振谱测定 | 第46-47页 |
| ·蛋白金属含量测定 | 第47页 |
| ·蛋白质结晶 | 第47-49页 |
| ·结晶方法 | 第47页 |
| ·溶液配制 | 第47-48页 |
| ·晶体鉴定 | 第48-49页 |
| 第三章 结果与分析 | 第49-81页 |
| ·高纯ΔnifZ Av1 的制备 | 第49-67页 |
| ·ΔnifZ Av1 的纯度及其主要污染蛋白的发现和鉴定 | 第49-61页 |
| ·主要污染蛋白的发现 | 第49-52页 |
| ·主要污染蛋白质的鉴定 | 第52-61页 |
| ·ΔnifZ Av1 与其主要污染蛋白的分离 | 第61-67页 |
| ·凝胶柱层析的分步收集 | 第62-63页 |
| ·Q-Sepharose 柱的梯度洗脱 | 第63-67页 |
| ·ΔnifZ Av1 蛋白金属簇的组成和分布及其与功能的关系 | 第67-73页 |
| ·ΔnifZ Av1 的亚基组成 | 第67-68页 |
| ·ΔnifZ Av1 的蛋白活性 | 第68页 |
| ·ΔnifZ Av1 的波谱特性 | 第68-72页 |
| ·ΔnifZ Av1 的吸收光谱 | 第68-69页 |
| ·ΔnifZ Av1 的EPR 谱 | 第69-71页 |
| ·ΔnifZ Av1的CD谱 | 第71-72页 |
| ·ΔnifZ Av1 的金属含量 | 第72页 |
| ·ΔnifZ Av1的推测结构模型 | 第72-73页 |
| ·ΔnifZ Av1 的结晶 | 第73-81页 |
| ·ΔnifZ Av1 的结晶条件 | 第74-78页 |
| ·Hepes 和Tris 对ΔnifZ Av1 制备物晶体生长的影响 | 第75-76页 |
| ·pH对ΔnifZ Av1晶体生长的影响 | 第76页 |
| ·MgCl_2浓度ΔnifZ Av1 制备物晶体生长的影响 | 第76-77页 |
| ·PEG 6K 的浓度对ΔnifZ Av1 制备物晶体生长的影响 | 第77-78页 |
| ·几个生长出质好个大晶体的培养条件 | 第78页 |
| ·ΔnifZ Av1 的晶体鉴定 | 第78-81页 |
| 第四章 讨论 | 第81-86页 |
| ·固氮酶制备物中几种常见的主要污染蛋白质的分离及鉴定 | 第81-82页 |
| ·nifZ 基因的功能 | 第82-84页 |
| ·ΔnifZ Av1 的结晶研究 | 第84-86页 |
| 小结与创新点 | 第86-87页 |
| 参考文献 | 第87-104页 |
| 发表及待发表论文 | 第104-106页 |
| 缩略语 | 第106-108页 |
| 致谢 | 第108-109页 |
