| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-15页 |
| 前言 | 第15-16页 |
| 第一章 文献综述——动物脂肪组织的分化起源、分泌功能和调控机制 | 第16-35页 |
| ·脂肪组织的分化起源研究 | 第16-19页 |
| ·脂肪分化起源研究的模型 | 第16-17页 |
| ·白色脂肪、棕色脂肪和肌肉细胞的分化起源 | 第17-18页 |
| ·脂肪组织中的前体脂肪细胞的鉴定 | 第18页 |
| ·肌肉组织中的前体脂肪细胞鉴定 | 第18-19页 |
| ·脂肪前体细胞的其它来源 | 第19页 |
| ·脂肪组织是一个活跃的分泌器官 | 第19-24页 |
| ·瘦素（Leptin） | 第20-21页 |
| ·脂联素（Adiponectin） | 第21-23页 |
| ·肿瘤坏死因子 a（Tumour necrosis factor a, TNFa） | 第23页 |
| ·白介素 6（Interleukin-6, IL6） | 第23-24页 |
| ·抵抗素（Resistin） | 第24页 |
| ·脂肪细胞分化的重要调控基因和调控通路 | 第24-34页 |
| ·PPARg 和 C/EBPs | 第24-26页 |
| ·Hedgehog 信号通路 | 第26-27页 |
| ·Wnt/beta-catenin 信号通路 | 第27-28页 |
| ·Notch 信号通路 | 第28页 |
| ·BMPs | 第28-29页 |
| ·AMPK | 第29-30页 |
| ·KLFs | 第30页 |
| ·FGF | 第30页 |
| ·Insulin 和 IGF1 信号通路 | 第30-31页 |
| ·其他调控因素 | 第31-34页 |
| ·展望 | 第34-35页 |
| 第二章 牛不同部位脂肪组织中候选基因的表达差异 | 第35-47页 |
| ·材料与方法 | 第35-39页 |
| ·试验动物 | 第35页 |
| ·组织样品的采取 | 第35页 |
| ·候选基因选择及引物设计 | 第35-37页 |
| ·RNA 的提取和 cDNA 的合成 | 第37页 |
| ·荧光定量 PCR 检测候选基因的表达 | 第37-38页 |
| ·统计分析 | 第38-39页 |
| ·结果与分析 | 第39-44页 |
| ·RNA 的提取 | 第39页 |
| ·cDNA 的制备 | 第39页 |
| ·定量 PCR | 第39-40页 |
| ·不同部位脂肪候选基因的表达模式 | 第40-42页 |
| ·皮下、胸腔和腹腔脂肪中候选基因相对于肌间脂肪的表达量 | 第42-44页 |
| ·讨论 | 第44-45页 |
| ·肌间脂肪和腹腔脂肪的代谢更加活跃 | 第44页 |
| ·前脂肪细胞的形成与分化影响不同部位脂肪组织的沉积 | 第44-45页 |
| ·小结 | 第45-47页 |
| 第三章 牛 SHH 蛋白能够抑制前体脂肪细胞的分化 | 第47-57页 |
| ·材料与方法 | 第47-51页 |
| ·试验材料 | 第47页 |
| ·基因组 DNA 的提取 | 第47页 |
| ·使用 Overlap PCR 方法克隆牛 SHH 基因 | 第47-49页 |
| ·序列的克隆、测序验证及生物信息学分析 | 第49页 |
| ·牛 SHH 基因的原核表达 | 第49-50页 |
| ·牛 SHH 的蛋白纯化和 Western blotting 检测 | 第50页 |
| ·3T3-L1 细胞的培养和诱导分化 | 第50页 |
| ·3T3-L1 细胞的油红 O 染色及分光光度计测定 | 第50页 |
| ·统计分析 | 第50-51页 |
| ·结果与分析 | 第51-55页 |
| ·利用 Overlap PCR 克隆牛 SHH 基因全长 CDS 序列 | 第51页 |
| ·测序及序列分析 | 第51-52页 |
| ·牛 SHH 基因原核表达载体的构建 | 第52-53页 |
| ·牛 SHH 的原核表达 | 第53页 |
| ·牛 SHH 蛋白纯化 | 第53-54页 |
| ·牛 SHH 的 Western blotting 检测 | 第54页 |
| ·重组牛 SHH 能够抑制 3T3-L1 细胞的分化 | 第54-55页 |
| ·讨论 | 第55-56页 |
| ·Overlap PCR 是一种高效的基因克隆方法 | 第55页 |
| ·重组牛 SHH 蛋白能够抑制脂肪细胞的分化 | 第55-56页 |
| ·小结 | 第56-57页 |
| 第四章 牛 SHH 基因通过 PPARg 通路调控脂肪生成 | 第57-67页 |
| ·材料与方法 | 第57-59页 |
| ·试验材料 | 第57页 |
| ·牛不同组织 cDNA 池的构建 | 第57-58页 |
| ·利用 RT-PCR 克隆牛 PPARg 基因和 Nr2f2 基因 | 第58页 |
| ·牛 SHH、PPARg 和 Nr2f2 真核表达载体的构建 | 第58-59页 |
| ·质粒的转染及 3T3-L1 细胞的诱导分化 | 第59页 |
| ·定量 PCR | 第59页 |
| ·统计分析 | 第59页 |
| ·结果与分析 | 第59-65页 |
| ·牛 cDNA 池的构建 | 第59页 |
| ·牛 PPARg 和 Nr2f2 的克隆 | 第59-61页 |
| ·牛 PPARg、Nr2f2 和 SHH 真核表达载体的构建 | 第61页 |
| ·牛 SHH 基因通过 PPARg 通路调控脂肪生成 | 第61-63页 |
| ·牛 Nr2f2 介导了 SHH 对 PPARg 的抑制作用 | 第63-65页 |
| ·讨论 | 第65-66页 |
| ·牛 SHH 通过 PPARg 抑制脂肪细胞的分化 | 第65页 |
| ·Nr2f2 能够部分介导牛 SHH 对 PPARg 的抑制作用 | 第65-66页 |
| ·小结 | 第66-67页 |
| 第五章 利用双色荧光报告系统鉴定 PPARg 基因启动子 | 第67-75页 |
| ·材料与方法 | 第67-69页 |
| ·试验材料 | 第67页 |
| ·双色荧光报告系统的构建 | 第67-69页 |
| ·PPARg 基因启动子的预测及克隆 | 第69页 |
| ·构建 pDF-PPARg-putative-promoter 载体 | 第69页 |
| ·细胞培养、转染和诱导分化 | 第69页 |
| ·启动子活性的鉴定 | 第69页 |
| ·结果与分析 | 第69-72页 |
| ·成功构建了双荧光报告系统 pDF-basic | 第69-70页 |
| ·预测并克隆了 PPARg 的启动子片段 | 第70-71页 |
| ·3T3-L1 细胞在诱导分化时 PPARg 启动子的活性得到增强 | 第71-72页 |
| ·讨论 | 第72-74页 |
| ·双色荧光报告系统能够实时定量的检测目标启动子的活性 | 第72-73页 |
| ·PPARg 启动子的活性在脂肪细胞分化时得到增强 | 第73-74页 |
| ·小结 | 第74-75页 |
| 第六章 牛原代肌肉细胞中过表达 PPARg 有助于肌内脂肪的生成 | 第75-87页 |
| ·材料与方法 | 第75-79页 |
| ·试验材料 | 第75页 |
| ·用于腺病毒包装的引物设计 | 第75-76页 |
| ·重组菌 BJ5183 感受态细胞的制备 | 第76页 |
| ·PPARg 腺病毒载体的构建与包装 | 第76-77页 |
| ·293A 细胞的培养 | 第77页 |
| ·目的基因的检测 | 第77页 |
| ·腺病毒的收获及扩增 | 第77-78页 |
| ·腺病毒滴度的测定 | 第78页 |
| ·牛肌肉原代细胞的培养 | 第78页 |
| ·腺病毒感染牛肌肉原代细胞 | 第78页 |
| ·牛肌肉原代细胞中候选基因的表达变化 | 第78-79页 |
| ·油红 O 染色 | 第79页 |
| ·统计分析 | 第79页 |
| ·结果与分析 | 第79-84页 |
| ·pAdTrack-CMV-PPARg 的构建 | 第79页 |
| ·pAdeasy-1-PPARg 的构建 | 第79-80页 |
| ·腺病毒 Ad-PPARg 的包装 | 第80页 |
| ·腺病毒 Ad-PPARg 的鉴定 | 第80-81页 |
| ·腺病毒 Ad-PPARg 的扩增及滴度测定 | 第81页 |
| ·感染牛原代肌肉细胞 | 第81-82页 |
| ·候选基因的表达变化 | 第82-84页 |
| ·牛原代肌肉细胞的油红 O 染色鉴定 | 第84页 |
| ·讨论 | 第84-86页 |
| ·腺病毒包装的过表达载体是原代细胞研究的有力工具 | 第84-85页 |
| ·体外培养的肌肉细胞中过表达 PPARg 有利于肌内脂肪的生成 | 第85-86页 |
| ·小结 | 第86-87页 |
| 第七章 牛 PPARg 基因 Asp7Gly 突变抑制其诱导脂肪分化的能力 | 第87-100页 |
| ·材料与方法 | 第87-90页 |
| ·试验动物 | 第87页 |
| ·试验材料 | 第87页 |
| ·利用 PCR-SSCP 扫描牛 PPARg 基因所有外显子区的多态性 | 第87-88页 |
| ·利用 PCR-RFLP 和 F-PCR-RFLP 检测突变在群体中的分布规律 | 第88页 |
| ·PPARg Asp7Gly 两种单倍型的载体构建 | 第88-89页 |
| ·检测 PPARg 的诱导脂肪细胞分化的能力 | 第89页 |
| ·实时定量 PCR 检测 CIDEC 的转录水平 | 第89页 |
| ·统计与分析 | 第89-90页 |
| ·结果与分析 | 第90-97页 |
| ·牛基因组 DNA 的提取 | 第90页 |
| ·牛 PPARg 基因 7 个外显子的 PCR-SSCP 检测结果 | 第90页 |
| ·突变个体的测序分析 | 第90-91页 |
| ·利用 PCR-RFLP 和 F-PCR-RFLP 检测突变 | 第91-92页 |
| ·PPARg 基因多态性的群体遗传学分析 | 第92-93页 |
| ·PPARg 基因 SNPs 连锁不平衡分析 | 第93-94页 |
| ·PPARg 基因 SNPs 与牛体尺性状的关联分析 | 第94页 |
| ·PPARg 组合基因型与牛体尺性状的关联分析 | 第94页 |
| ·PPARg Asp7Gly 两种单倍型的构建 | 第94-95页 |
| ·Asp7Gly 降低了 PPARg 诱导脂肪细胞分化的能力 | 第95-96页 |
| ·Asp7Gly 降低了 PPARg 的转录活性 | 第96-97页 |
| ·讨论 | 第97-99页 |
| ·PPARg 的-110G>C、-27C>T 和+20A>G 突变与牛的体尺指标相关联 | 第97-98页 |
| ·PPARg 的 Asp7Gly 突变降低了其诱导脂肪细胞分化的能力 | 第98-99页 |
| ·小结 | 第99-100页 |
| 第八章 结论与创新点 | 第100-101页 |
| ·结论 | 第100页 |
| ·创新点 | 第100-101页 |
| 参考文献 | 第101-112页 |
| 附录 Ⅰ 本研究中所使用的主要试剂和仪器 | 第112-118页 |
| 附录 Ⅱ 本研究中所使用的主要试验方法 | 第118-132页 |
| 致谢 | 第132-133页 |
| 作者简介 | 第133页 |
