| 缩写与中英文对照 | 第1-8页 |
| 摘要 | 第8-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-29页 |
| ·蛋白质药物简介 | 第11-14页 |
| ·蛋白质药物的聚乙二醇修饰 | 第14-23页 |
| ·PEG修饰的原理与方法 | 第14-18页 |
| ·氨基的修饰 | 第15-16页 |
| ·半胱氨酸(巯基)的修饰 | 第16-17页 |
| ·氧化的糖或N端的修饰 | 第17-18页 |
| ·PEG修饰条件的选择 | 第18-19页 |
| ·PEG修饰剂的选择 | 第18-19页 |
| ·修饰反应的影响因素 | 第19页 |
| ·PEG修饰过程 | 第19页 |
| ·液相反应 | 第19页 |
| ·固相反应 | 第19页 |
| ·反应产物的鉴定和检测 | 第19-21页 |
| ·蛋白质或多肽的平均修饰度 | 第20页 |
| ·修饰位点和位置异构体的检测 | 第20页 |
| ·偶合物的均一性 | 第20-21页 |
| ·PEG修饰蛋白药物的开发与临床应用状况 | 第21-23页 |
| ·抗凝溶栓药物——降纤酶 | 第23-27页 |
| ·血栓与栓塞 | 第23-25页 |
| ·血栓形成机制 | 第24页 |
| ·溶栓药物的溶栓途径 | 第24-25页 |
| ·降纤酶(Defibrase，Df) | 第25-26页 |
| ·降纤酶的研究历史 | 第25页 |
| ·降纤酶的适应症 | 第25-26页 |
| ·降纤酶的性质 | 第26页 |
| ·降纤酶在溶栓市场中的表现 | 第26-27页 |
| ·本课题的立题意义和研究内容 | 第27-29页 |
| ·立题意义 | 第27-28页 |
| ·研究内容 | 第28-29页 |
| ·降纤酶与PEG的修饰及产物的分离纯化 | 第28页 |
| ·修饰产物的性质研究 | 第28-29页 |
| 第二章 降纤酶与MPEG的修饰及产物的分离纯化 | 第29-56页 |
| ·材料与仪器 | 第29-31页 |
| ·主要材料与试剂 | 第29页 |
| ·层析填料 | 第29-30页 |
| ·主要仪器和设备 | 第30-31页 |
| ·试验方法 | 第31-39页 |
| ·修饰反应及分离纯化流程 | 第31-32页 |
| ·Folin-酚法测定蛋白质浓度 | 第32-33页 |
| ·Df酶活效价测定 | 第33页 |
| ·标准溶液的配置 | 第33页 |
| ·供试品溶液的准备 | 第33页 |
| ·测定法 | 第33页 |
| ·比活力计算 | 第33-34页 |
| ·Df与mPEG-ALD30000的反应 | 第34页 |
| ·Df与mPEG-SPA5000的反应 | 第34页 |
| ·Df与mPEG-SBA5000的反应 | 第34页 |
| ·Df与mPEG_2-NHS40000的反应 | 第34页 |
| ·Df与mPEG-SPA30000的反应 | 第34页 |
| ·正交试验 | 第34-35页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第35-38页 |
| ·制备分离胶、浓缩胶 | 第35-36页 |
| ·样品的处理与上样 | 第36-37页 |
| ·电泳 | 第37页 |
| ·固定、染色、脱色 | 第37-38页 |
| ·分子筛凝胶过滤层析 | 第38页 |
| ·阴离子交换过滤层析检测修饰纯度 | 第38-39页 |
| ·HPLC测定纯度 | 第39页 |
| ·试验结果 | 第39-55页 |
| ·Df在superdex75分子筛上的保留体积 | 第39-40页 |
| ·Df的酶活曲线 | 第40页 |
| ·Df与mPEG-ALD30000的反应 | 第40-42页 |
| ·superdex 75分子筛分离纯化 | 第40页 |
| ·superdex75检测纯度 | 第40-41页 |
| ·SDS-PAGE检测分离液 | 第41页 |
| ·酶活 | 第41-42页 |
| ·Df与mPEG-SBA5000的反应液 | 第42-44页 |
| ·superdex75分子筛分离纯化 | 第42页 |
| ·superdex75分子筛检测纯度 | 第42-43页 |
| ·SDS-PAGE分析 | 第43页 |
| ·酶活 | 第43-44页 |
| ·Df与mPEG-SPA5000的反应 | 第44-46页 |
| ·分子筛凝胶过滤分离纯化 | 第44页 |
| ·superdex75凝胶柱检测纯度 | 第44页 |
| ·SDS-PAGE分析反应液 | 第44-45页 |
| ·SDS-PAGE检测mDf5000分子量 | 第45-46页 |
| ·酶活 | 第46页 |
| ·Df与mPEG_2-NHS40000的反应 | 第46-49页 |
| ·superdex75分子筛分离纯化 | 第46-47页 |
| ·superdex75检测纯度 | 第47页 |
| ·SDS-PAGE检测纯度 | 第47-48页 |
| ·HiTrap Q柱分离 | 第48页 |
| ·酶活 | 第48-49页 |
| ·Df与mPEG-SPA30000的反应 | 第49-52页 |
| ·superdex75分子筛分离纯化 | 第49-50页 |
| ·分子筛凝胶过滤检测纯度 | 第50页 |
| ·SDS-PAGE分析反应液 | 第50-51页 |
| ·SDS-PAGE检测修饰产物分子量 | 第51-52页 |
| ·酶活 | 第52页 |
| ·HPLC分析Df、mDf5000、mDf30000 | 第52-53页 |
| ·正交试验确定最佳反应条件 | 第53-55页 |
| ·修饰率与回收率 | 第55页 |
| ·小结 | 第55-56页 |
| 第三章 降纤酶及聚乙二醇化降纤酶的性质研究 | 第56-69页 |
| ·材料与仪器 | 第56-57页 |
| ·主要材料与试剂 | 第56页 |
| ·试验动物 | 第56页 |
| ·主要仪器和设备 | 第56-57页 |
| ·试验方法 | 第57-59页 |
| ·Folin-酚法测定蛋白质浓度 | 第57页 |
| ·酶活效价测定 | 第57页 |
| ·质谱 | 第57页 |
| ·HPLC分析胰酶水解液 | 第57页 |
| ·稳定性试验 | 第57-58页 |
| ·热稳定性试验 | 第57页 |
| ·抗酶切稳定性试验 | 第57页 |
| ·反复冻融对酶活的影响 | 第57-58页 |
| ·免疫原性试验 | 第58页 |
| ·试剂配制 | 第58页 |
| ·操作过程 | 第58页 |
| ·去纤维蛋白作用试验 | 第58-59页 |
| ·试验结果 | 第59-68页 |
| ·Folin-酚法测定蛋白质浓度 | 第59页 |
| ·酶活测定 | 第59-60页 |
| ·MALDI-TOF-MS分子量确认 | 第60-61页 |
| ·HPLC分析胰蛋白酶水解液 | 第61-63页 |
| ·稳定性试验 | 第63-67页 |
| ·热稳定性试验 | 第63-65页 |
| ·抗酶切稳定性试验 | 第65-66页 |
| ·反复冻融的稳定性试验 | 第66-67页 |
| ·双向琼脂扩散试验 | 第67-68页 |
| ·降纤试验 | 第68页 |
| ·小结 | 第68-69页 |
| 第四章 结论 | 第69-70页 |
| 第五章 讨论 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 综述报告和发表论文 | 第77-78页 |
| 附录 | 第78-80页 |