大鼠Fah基因敲除胚胎干细胞株的建立
| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-12页 |
| 缩写词 | 第12-13页 |
| 第一章 前言 | 第13-18页 |
| 1 基因敲除概述 | 第14-16页 |
| ·基因敲除定义 | 第14-15页 |
| ·基因敲除最新研究概况 | 第15-16页 |
| 2 Fah基因研究概况 | 第16-18页 |
| 第二章 Fah基因敲除载体的构建与鉴定 | 第18-31页 |
| 1 材料、试剂和仪器 | 第18-20页 |
| ·质粒和细胞 | 第18页 |
| ·试剂 | 第18-19页 |
| ·仪器 | 第19页 |
| ·所用到的引物表 | 第19-20页 |
| ·试剂配制 | 第20页 |
| 2 方法 | 第20-27页 |
| ·通用型载体pKO的构建与鉴定 | 第20-24页 |
| ·Fah基因敲除载体同源臂的插入与鉴定 | 第24-27页 |
| 3 结果与分析 | 第27-29页 |
| ·pKO载体酶切鉴定 | 第27-28页 |
| ·同源臂的扩增与pKO+FAH载体质粒酶切鉴定 | 第28-29页 |
| 4 讨论 | 第29-30页 |
| 5 小结 | 第30-31页 |
| 第三章 电穿孔转染和克隆的筛选 | 第31-44页 |
| 1 材料、试剂和仪器 | 第31-33页 |
| ·质粒和细胞 | 第31页 |
| ·试剂 | 第31-32页 |
| ·仪器 | 第32页 |
| ·试剂配制 | 第32-33页 |
| 2 方法 | 第33-38页 |
| ·滋养层细胞(MEF)的制备与处理 | 第33页 |
| ·超数排卵 | 第33页 |
| ·冲囊胚及大鼠ES细胞的获取 | 第33-34页 |
| ·定量RT-PCR检测胚胎干细胞标志基因表达 | 第34-36页 |
| ·大鼠ES细胞的复苏与传代 | 第36-37页 |
| ·电穿孔转染 | 第37页 |
| ·同源重组ES细胞克隆的筛选 | 第37-38页 |
| 3 结果 | 第38-42页 |
| ·DA大鼠ES细胞制备 | 第38-40页 |
| ·同源重组ES细胞克隆的筛选 | 第40-42页 |
| 4 讨论 | 第42-43页 |
| 5 结论 | 第43-44页 |
| 第四章 同源重组ES细胞克隆的鉴定 | 第44-49页 |
| 1 材料、试剂和仪器 | 第44-46页 |
| ·细胞 | 第44页 |
| ·试剂 | 第44-45页 |
| ·仪器 | 第45页 |
| ·试剂配制 | 第45-46页 |
| ·所需的引物 | 第46页 |
| 2 方法 | 第46-47页 |
| 3 结果 | 第47-48页 |
| 4 讨论 | 第48页 |
| 5 结论 | 第48-49页 |
| 第五章 结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-52页 |
| 致谢 | 第52页 |
