| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-22页 |
| ·转录后基因沉默 | 第15-16页 |
| ·RNAi概述 | 第15页 |
| ·作用机制 | 第15-16页 |
| ·病毒介导的基因沉默 | 第16-19页 |
| ·目前已有VIGS载体概述 | 第16-18页 |
| ·VIGS在植物基因功能研究上的广泛应用 | 第18页 |
| ·VIGS研究植物基因功能明显的优势 | 第18-19页 |
| ·CMV概述及其VIGS载体 | 第19-20页 |
| ·本文的研究目的与意义 | 第20-22页 |
| ·研究的目的与意义 | 第20-21页 |
| ·研究内容 | 第21-22页 |
| 第二章 pTsh RNA2 2b的缺失重组克隆构建 | 第22-36页 |
| ·材料与方法 | 第22-28页 |
| ·CMV-Fny以及CMV不同株系的RNA2 | 第22页 |
| ·寄主 | 第22页 |
| ·基于pTsh RNA2构建不同的CMV-VIGS候选载体 | 第22-26页 |
| ·NbPDS片段插入重组质粒构建 | 第26-28页 |
| ·结果与分析 | 第28-34页 |
| ·由不同CMV RNA2组成假重组病毒在本氏烟上的症状反应 | 第28-29页 |
| ·2b基因缺失的pTsh RNA2克隆载体的构建 | 第29-30页 |
| ·2b基因缺失的pTsh RNA2克隆载体重组克隆菌液PCR鉴定 | 第30-31页 |
| ·重组克隆测序结果 | 第31-32页 |
| ·RT-PCR扩增NbPDS插入片段 | 第32页 |
| ·插入NbPDS片段重组克隆的鉴定 | 第32-33页 |
| ·由2b基因缺失Tsh RNA2重组克隆所组成的假重组病毒在寄主上的表型 | 第33-34页 |
| ·小结与讨论 | 第34-36页 |
| 第三章 利用pTshRNA2沉默不同的靶标基因 | 第36-48页 |
| ·材料与方法 | 第36-39页 |
| ·Semi-RT-PCR分析本氏烟中PDS、Su、GFP表达量 | 第36-38页 |
| ·病毒稳定性分析 | 第38页 |
| ·插入启动子片段重组克隆沉默效率分析 | 第38页 |
| ·插入大豆PDS重组克隆构建 | 第38-39页 |
| ·插入Beclin片段重组克隆构建 | 第39页 |
| ·结果与分析 | 第39-46页 |
| ·不同基因插入片段的RT-PCR扩增 | 第39-40页 |
| ·重组克隆的菌液PCR鉴定 | 第40-41页 |
| ·不同指示基因的被沉默后植株表型和靶标基因表达量的分析 | 第41-43页 |
| ·假重组病毒的稳定性分析 | 第43-44页 |
| ·以启动子作为插入片段分析靶标基因的沉默情况 | 第44-45页 |
| ·大豆的PDS下调表达后表达表型 | 第45页 |
| ·转NN基因烟草Beclin下调表达后接TMV的症状反应 | 第45-46页 |
| ·小结与讨论 | 第46-48页 |
| 第四章 CMV农杆菌侵染性克隆构建 | 第48-55页 |
| ·材料与方法 | 第48-51页 |
| ·pCB301重组克隆构建 | 第48-49页 |
| ·转化农杆菌 | 第49-50页 |
| ·农杆菌浸润接种 | 第50-51页 |
| ·结果与分析 | 第51-54页 |
| ·CMV基因组全长扩增 | 第51-52页 |
| ·pCB301重组克隆HindⅢ酶切鉴定 | 第52页 |
| ·农杆菌转化的PCR鉴定 | 第52-53页 |
| ·农杆菌浸润接种病毒后植株的表型 | 第53-54页 |
| ·小结与讨论 | 第54-55页 |
| 结论与展望 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-60页 |
| 附录：重要溶液的配制 | 第60-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 攻读硕士期间的研究成果 | 第63页 |
