| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 目录 | 第7-10页 |
| 缩略表 | 第10-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-17页 |
| 1 革兰氏阴性菌 | 第11-12页 |
| 2 外膜蛋白 | 第12-14页 |
| 3 外膜蛋白 OmpW | 第14-16页 |
| 4 研究的目的和意义 | 第16-17页 |
| 第二章 OmpW 敲除菌的构建 | 第17-31页 |
| 1 前言 | 第17-18页 |
| 2 实验材料 | 第18-20页 |
| ·主要仪器及试剂 | 第18-19页 |
| ·主要仪器 | 第18-19页 |
| ·主要试剂 | 第19页 |
| ·主要材料 | 第19页 |
| ·分析软件 | 第19-20页 |
| ·主要溶液配制 | 第20页 |
| 3 实验方法 | 第20-26页 |
| ·引物设计 | 第20-21页 |
| ·扩增 Kan 抗性基因片段 | 第21-22页 |
| ·制备感受态细胞 | 第22页 |
| ·转化及制备电转感受态 | 第22页 |
| ·电转化 | 第22-23页 |
| ·PCR 检测及抗性基因的去除 | 第23页 |
| ·Western blot 验证 | 第23-24页 |
| ·制样及 SDS-PAGE | 第23页 |
| ·Western blot | 第23-24页 |
| ·胶内酶解 | 第24-25页 |
| ·MALDI-TOF-TOF 质谱鉴定和数据库搜索 | 第25-26页 |
| 4 实验结果 | 第26-29页 |
| ·以 pKD13F 和 pKD13R 为引物的 PCR 结果图谱 | 第26页 |
| ·以 OmpW-F 和 OmpW-R 为引物的 PCR 结果图谱 | 第26-27页 |
| ·电转后的 PCR 鉴定图谱 | 第27页 |
| ·Kan 抗性基因去除 PCR 鉴定图谱 | 第27-28页 |
| ·Western blot 鉴定结果 | 第28页 |
| ·膜蛋白 SDS-PAGE 结果 | 第28-29页 |
| ·质谱肽质量指纹图谱分析及鉴定的结果 | 第29页 |
| 5 讨论 | 第29-31页 |
| 第三章 k12 和ΔOmpW 抗吞噬差异研究 | 第31-40页 |
| 1 前言 | 第31页 |
| 2 实验材料 | 第31-32页 |
| ·主要试剂 | 第31页 |
| ·主要仪器 | 第31-32页 |
| ·生物材料 | 第32页 |
| ·主要溶液配制 | 第32页 |
| 3 实验方法 | 第32-35页 |
| ·细菌体外抗巨噬细胞吞噬实验 | 第32-33页 |
| ·THP-1 细胞的培养 | 第32-33页 |
| ·k12 和ΔOmpW 的 FITC 标记 | 第33页 |
| ·THP-1 细胞的诱导 | 第33页 |
| ·标记细菌与巨噬细胞的作用 | 第33页 |
| ·巨噬细胞内存活菌的膜蛋白差异研究 | 第33-34页 |
| ·小鼠体内细菌抗巨噬细胞吞噬实验 | 第34-35页 |
| ·注射前处理 | 第34页 |
| ·腹腔取巨噬细胞观察抗吞噬差异 | 第34页 |
| ·小鼠体内巨噬细胞吞噬细菌数量差异 | 第34-35页 |
| 4 实验结果 | 第35-38页 |
| ·细菌 FITC 标记图 | 第35页 |
| ·将 THP-1 细胞诱导为巨噬细胞 | 第35页 |
| ·细菌和巨噬细胞处理后结果 | 第35-36页 |
| ·膜蛋白 SDS-PAGE | 第36-37页 |
| ·质谱肽质量指纹图谱分析及鉴定的结果 | 第37页 |
| ·小鼠体内细菌抗巨噬细胞吞噬差异结果 | 第37-38页 |
| ·小鼠体内巨噬细胞内吞噬细菌数量差异结果 | 第38页 |
| ·数据统计 | 第38页 |
| 5 讨论 | 第38-40页 |
| 第四章 K12 与ΔOmpW 血浆杀菌率比较 | 第40-44页 |
| 1 前言 | 第40页 |
| 2 实验材料及试剂 | 第40页 |
| 3 实验方法 | 第40-41页 |
| ·人血浆杀菌率比较 | 第40页 |
| ·小鼠体内血液杀菌率差异实验 | 第40-41页 |
| 4 实验结果 | 第41-43页 |
| ·人血浆杀菌率差异及结果统计 | 第41-42页 |
| ·小鼠体内血液杀菌率差异 | 第42-43页 |
| ·体内杀菌率差异图 | 第42页 |
| ·杀菌率统计 | 第42-43页 |
| 5 讨论 | 第43-44页 |
| 第五章 小鼠的主动保护实验 | 第44-48页 |
| 1 前言 | 第44页 |
| 2 实验材料 | 第44-45页 |
| ·材料 | 第44页 |
| ·主要试剂及其配制 | 第44-45页 |
| 3 实验方法 | 第45-46页 |
| ·透析袋前处理 | 第45页 |
| ·OmpW 蛋白纯化 | 第45页 |
| ·免疫小鼠 | 第45-46页 |
| ·效价检测 | 第46页 |
| ·主动保护 | 第46页 |
| 4 实验结果 | 第46-47页 |
| ·蛋白纯化结果 | 第46-47页 |
| ·效价检测结果 | 第47页 |
| ·主动保护结果 | 第47页 |
| 5 讨论 | 第47-48页 |
| 第六章 结论与展望 | 第48-49页 |
| 1. 结论 | 第48页 |
| 2. 展望 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-54页 |
| 致谢 | 第54页 |
