| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-17页 |
| 1 前言 | 第17-44页 |
| ·牙周病 | 第17-39页 |
| ·牙周病的危害 | 第17-19页 |
| ·牙周病的临床症状 | 第17-18页 |
| ·牙周病与全身系统性疾病的关系 | 第18-19页 |
| ·牙周病与心血管系统疾病 | 第18页 |
| ·牙周病与糖尿病 | 第18-19页 |
| ·牙周病与低出生体重儿 | 第19页 |
| ·牙周病与消化道疾病 | 第19页 |
| ·牙菌斑生物膜是牙周病的始动因素 | 第19-39页 |
| ·细菌生物膜 | 第19-25页 |
| ·细菌生物膜的特性 | 第19-20页 |
| ·生物膜的发育过程 | 第20-23页 |
| ·细菌生物膜感染的机制 | 第23-25页 |
| ·A.a生物膜与牙周病 | 第25-39页 |
| ·A.a生物膜的特征 | 第25-26页 |
| ·A.a生物膜的形成 | 第26-28页 |
| ·菌毛 | 第26-27页 |
| ·多聚β-1,6-N-乙酰葡聚糖胺 | 第27-28页 |
| ·A.a产生的毒力因子 | 第28-30页 |
| ·与牙周组织免疫反应有关细胞因子 | 第30-39页 |
| ·多聚β-1,6-N-乙酰葡聚糖胺及N-乙酰氨基葡萄糖苷酶 | 第39-44页 |
| ·多聚β-1,6-N-乙酰葡聚糖胺(poly β-1,6-GlcNAc,PGA) | 第39-41页 |
| ·多聚β-1,6-N-乙酰葡聚糖胺的来源 | 第39页 |
| ·PGA的构成 | 第39-41页 |
| ·N-乙酰氨基葡萄糖苷酶——DspB | 第41-44页 |
| ·DspB的底物特异性 | 第42页 |
| ·DspB的结构功能分析 | 第42页 |
| ·DspB抗生物膜的研究 | 第42-44页 |
| 2.N-乙酰氨基葡萄糖苷酶NagY1产生菌假交替单胞菌QY403的筛选与鉴定 | 第44-50页 |
| ·材料与方法 | 第44-47页 |
| ·菌种及培养基 | 第44-45页 |
| ·产酶菌株的筛选 | 第45页 |
| ·菌株的分离 | 第45页 |
| ·发酵条件 | 第45页 |
| ·N-乙酰氨基葡萄糖苷酶NagY1活性测定 | 第45页 |
| ·产酶菌株的鉴定 | 第45-47页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第45-46页 |
| ·16S rRNA基因的克隆与分子系统学测定 | 第46-47页 |
| ·数据分析 | 第47页 |
| ·结果 | 第47-49页 |
| ·菌株筛选结果 | 第47页 |
| ·16S rRNA基因序列分析和分子系统学鉴定 | 第47-49页 |
| ·小结 | 第49-50页 |
| 3 N-乙酰氨基葡萄糖苷酶NagY1的分离纯化与性质分析 | 第50-62页 |
| ·材料与方法 | 第50-54页 |
| ·试剂和仪器 | 第50页 |
| ·仪器与设备 | 第50页 |
| ·试剂 | 第50页 |
| ·方法 | 第50-51页 |
| ·细菌裂解 | 第50页 |
| ·硫酸铵沉淀粗分离 | 第50-51页 |
| ·离子交换层析 | 第51页 |
| ·凝胶过滤层析 | 第51页 |
| ·实验所用检测方法 | 第51-52页 |
| ·蛋白质浓度测定方法 | 第51页 |
| ·SDS-PAG | 第51-52页 |
| ·酶活检测方法 | 第52页 |
| ·N-乙酰氨基葡萄糖苷酶NagY1的生化性质检测 | 第52-54页 |
| ·温度对酶活性的影响 | 第52-53页 |
| ·pH对酶活性的影响 | 第53页 |
| ·EDTA、金属离子对酶活性的影响 | 第53页 |
| ·底物特异性实验 | 第53-54页 |
| ·β-1,6-N-乙酰葡聚糖胺及β-1,4-N-乙酰葡聚糖胺的制备 | 第53-54页 |
| ·N-乙酰氨基葡萄糖苷酶NagY1底物特异性 | 第54页 |
| ·结果 | 第54-61页 |
| ·N-乙酰氨基葡萄糖苷酶NagY1分离纯化 | 第54-57页 |
| ·离子交换层析 | 第54页 |
| ·凝胶过滤层析 | 第54-56页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第56-57页 |
| ·N-乙酰氨基葡萄糖苷酶NagY1的性质分析 | 第57-61页 |
| ·温度对酶活性的影响 | 第57页 |
| ·pH对酶活性的影响 | 第57-59页 |
| ·EDTA、金属离子对酶活性的影响 | 第59页 |
| ·底物特异性试验 | 第59-61页 |
| ·小结 | 第61-62页 |
| 4 N-乙酰氨基葡萄糖苷酶NagY1抗伴放线放线杆菌生物膜作用 | 第62-71页 |
| ·材料与方法 | 第62-66页 |
| ·材料 | 第62-63页 |
| ·菌株 | 第62-63页 |
| ·试剂 | 第63页 |
| ·仪器及设备 | 第63页 |
| ·方法 | 第63-66页 |
| ·96孔板伴放线放线杆菌生物膜的构建 | 第63-64页 |
| ·盖玻片上A.a生物膜模型的构建 | 第64页 |
| ·N-乙酰氨基葡萄糖苷酶NagY1对伴放线放线杆菌已形成生物膜的降解作用 | 第64-65页 |
| ·N-乙酰氨基葡萄糖苷酶NagY1对伴放线放线杆菌生物膜形成的影响 | 第65页 |
| ·统计学分析 | 第65-66页 |
| ·结果 | 第66-69页 |
| ·96孔板上伴放线放线杆菌生物膜的建立 | 第66-67页 |
| ·盖玻片上伴放线放线杆菌生物膜的建立 | 第67-68页 |
| ·N-乙酰氨基葡萄糖苷酶NagY1对伴放线放线杆菌生物膜的降解作用 | 第68页 |
| ·N-乙酰氨基葡萄糖苷酶NagY1对伴放线放线杆菌生物膜形成的影响 | 第68-69页 |
| ·讨论 | 第69-71页 |
| 5 N-乙酰氨基葡萄糖苷酶NagY1对A.a生物膜致病性的影响 | 第71-92页 |
| ·材料 | 第71-78页 |
| ·菌株 | 第71-72页 |
| ·试剂 | 第72-73页 |
| ·仪器及设备 | 第73页 |
| ·A.a的培养 | 第73页 |
| ·人牙周韧带细胞的原代培养 | 第73-74页 |
| ·浮游及生物膜状态A.a与牙周韧带细胞共培养 | 第74-75页 |
| ·N-乙酰氨基葡萄糖苷酶NagY1对伴放线放线杆菌生物膜刺激牙周韧带细胞产生细胞因子mRNA的影响 | 第75页 |
| ·N-乙酰氨基葡萄糖苷酶NagY1对牙周韧带细胞状态的影响 | 第75-76页 |
| ·N-乙酰氨基葡萄糖苷酶NagY1对牙周韧带细胞细胞因子mRNA表达的影响 | 第76页 |
| ·细胞总RNA提取 | 第76页 |
| ·RNA反转录 | 第76-77页 |
| ·实时荧光定量PCR法检测人牙周韧带细胞产生的细胞因子mRNA的量 | 第77-78页 |
| ·PCR反应体系 | 第77页 |
| ·PCR反应条件 | 第77-78页 |
| ·统计分析 | 第78页 |
| ·结果 | 第78-89页 |
| ·浮游及生物膜状态A.a培养及细菌数量校正 | 第79页 |
| ·人牙周韧带细胞的培养及鉴定 | 第79-81页 |
| ·总RNA的提取 | 第81页 |
| ·RNA反转录 | 第81页 |
| ·实时荧光定量PCR分析 | 第81-89页 |
| ·实时荧光定量扩增曲线图 | 第81-84页 |
| ·人牙周韧带细胞分别与A.a生物膜和浮游菌共培养产生的细胞因子mRNA的表达量 | 第84-86页 |
| ·N-乙酰氨基葡萄糖苷酶NagY1对伴放线放线杆菌生物膜刺激牙周韧带细胞产生细胞因子mRNA的影响 | 第86-87页 |
| ·N-乙酰氨基葡萄糖苷酶NagY1对人牙周韧带细胞增殖功能的影响 | 第87页 |
| ·N-乙酰氨基葡萄糖苷酶NagY1对人牙周韧带细胞黏附功能的影响 | 第87-88页 |
| ·N-乙酰氨基葡萄糖苷酶NagY1对牙周韧带细胞细胞因子mRNA表达的影响 | 第88-89页 |
| ·讨论 | 第89-92页 |
| 参考文献 | 第92-106页 |
| 附录 | 第106-110页 |
| 致谢 | 第110-111页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第111页 |
