专业名词缩写中英文对照简表 | 第1-4页 |
摘要 | 第4-5页 |
ABSTRACT | 第5-10页 |
前言 | 第10-25页 |
1 染色质免疫沉淀技术简介 | 第10-16页 |
·细胞的甲醛固定 | 第10页 |
·超声波断裂染色质 | 第10-11页 |
·氯化铯等密度离心纯化交联的染色质 | 第11页 |
·染色质免疫沉淀和免疫沉淀复合体的纯化 | 第11页 |
·交联反应的逆转和DNA的纯化 | 第11-12页 |
·染色质免疫沉淀DNA的分析和蛋白质在DNA上结合位点鉴定 | 第12-15页 |
·目的蛋白和DNA靶序列特异结合的进一步验证 | 第15-16页 |
2 染色质免疫沉淀技术的应用 | 第16-19页 |
·在组蛋白修饰的研究 | 第17-18页 |
·在反式作用因子靶序列的研究 | 第18页 |
·在RNA-蛋白质相互作用的研究 | 第18-19页 |
3 染色质免疫沉淀技术的前景展望 | 第19-20页 |
4 转录激活因子AP-2基因家族 | 第20-25页 |
·转录激活因子AP-2基因家族的结构特点 | 第20-22页 |
·转录激活因子AP-2基因家族的生物学功能 | 第22-25页 |
第一部分 材料与方法 | 第25-42页 |
1 材料 | 第25-30页 |
·仪器设备 | 第25-26页 |
·试剂盒 | 第26页 |
·载体和工具酶 | 第26页 |
·抗体和蛋白 | 第26-27页 |
·菌种,小鼠和细胞株 | 第27页 |
·溶液配制 | 第27-30页 |
·其它试剂 | 第30页 |
2 实验方法 | 第30-42页 |
·细胞培养 | 第30-32页 |
·小鼠胚胎的获得 | 第32页 |
·免疫沉淀和Western Blot检测 | 第32-33页 |
·质粒pUC-19的处理 | 第33-35页 |
·染色质免疫沉淀(ChIP) | 第35-36页 |
·pUC19-ChIP-DNA重组载体的构建 | 第36-38页 |
·蓝白斑筛选、酶切和PCR验证和测序 | 第38页 |
·RNA抽提和相对定量RT-PCR | 第38-41页 |
·生物信息学分析 | 第41-42页 |
第二部分 结果与分析 | 第42-51页 |
1 抗体的特异性检测 | 第42页 |
2 MDA-MB-453、HeLa和小鼠胚胎中AP-2蛋白检测 | 第42-43页 |
3 超声打断染色质的有效性检测 | 第43页 |
4 pUC-19载体酶切和去磷酸化效果的检测 | 第43-44页 |
5 pUC19-ChIP-DNA质粒的部分PCR和酶切 | 第44-45页 |
6 染色质免疫沉淀技术筛选AP-2靶基因 | 第45-47页 |
7 AP-2γ转录因子对候选靶基因的mRNA转录水平的影响 | 第47-51页 |
第三部分 讨论 | 第51-54页 |
参考文献 | 第54-66页 |
附录 | 第66-68页 |
致谢 | 第68-69页 |