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染色质免疫沉淀技术筛选转录因子AP-2靶基因

专业名词缩写中英文对照简表第1-4页
摘要第4-5页
ABSTRACT第5-10页
前言第10-25页
 1 染色质免疫沉淀技术简介第10-16页
   ·细胞的甲醛固定第10页
   ·超声波断裂染色质第10-11页
   ·氯化铯等密度离心纯化交联的染色质第11页
   ·染色质免疫沉淀和免疫沉淀复合体的纯化第11页
   ·交联反应的逆转和DNA的纯化第11-12页
   ·染色质免疫沉淀DNA的分析和蛋白质在DNA上结合位点鉴定第12-15页
   ·目的蛋白和DNA靶序列特异结合的进一步验证第15-16页
 2 染色质免疫沉淀技术的应用第16-19页
   ·在组蛋白修饰的研究第17-18页
   ·在反式作用因子靶序列的研究第18页
   ·在RNA-蛋白质相互作用的研究第18-19页
 3 染色质免疫沉淀技术的前景展望第19-20页
 4 转录激活因子AP-2基因家族第20-25页
   ·转录激活因子AP-2基因家族的结构特点第20-22页
   ·转录激活因子AP-2基因家族的生物学功能第22-25页
第一部分 材料与方法第25-42页
 1 材料第25-30页
   ·仪器设备第25-26页
   ·试剂盒第26页
   ·载体和工具酶第26页
   ·抗体和蛋白第26-27页
   ·菌种,小鼠和细胞株第27页
   ·溶液配制第27-30页
   ·其它试剂第30页
 2 实验方法第30-42页
   ·细胞培养第30-32页
   ·小鼠胚胎的获得第32页
   ·免疫沉淀和Western Blot检测第32-33页
   ·质粒pUC-19的处理第33-35页
   ·染色质免疫沉淀(ChIP)第35-36页
   ·pUC19-ChIP-DNA重组载体的构建第36-38页
   ·蓝白斑筛选、酶切和PCR验证和测序第38页
   ·RNA抽提和相对定量RT-PCR第38-41页
   ·生物信息学分析第41-42页
第二部分 结果与分析第42-51页
 1 抗体的特异性检测第42页
 2 MDA-MB-453、HeLa和小鼠胚胎中AP-2蛋白检测第42-43页
 3 超声打断染色质的有效性检测第43页
 4 pUC-19载体酶切和去磷酸化效果的检测第43-44页
 5 pUC19-ChIP-DNA质粒的部分PCR和酶切第44-45页
 6 染色质免疫沉淀技术筛选AP-2靶基因第45-47页
 7 AP-2γ转录因子对候选靶基因的mRNA转录水平的影响第47-51页
第三部分 讨论第51-54页
参考文献第54-66页
附录第66-68页
致谢第68-69页

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