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人类心脏发育候选基因AHNAKβ的表达与功能研究

摘要第1-5页
ABSTRACT第5-11页
第一章 引言第11-24页
   ·心脏早期发育研究简述第11-12页
   ·调控脊椎动物心脏发育的基因第12-17页
     ·GATA第12-13页
     ·Nkx2.5第13-14页
     ·MEF-2家族第14-15页
     ·HAND基因第15页
     ·BMP家族第15-17页
   ·小鼠心脏的形态建成第17-21页
   ·本课题的研究意义第21-24页
第二章 材料与方法第24-49页
   ·材料第24-28页
     ·生物信息学软件第24-25页
     ·主要试剂第25-26页
     ·细胞、菌株和质粒第26-28页
     ·主要实验仪器和耗材第28页
   ·方法第28-49页
     ·AHNAKβ全长序列的计算机分析第28页
     ·用PCR反应从小鼠心脏cDNA文库中分离AHNAKβ.第28-32页
     ·重组质粒的构建第32-34页
     ·原核细胞诱导蛋白质表达及纯化第34-35页
     ·多克隆抗体的制备与纯化第35-37页
     ·胚胎各组织蛋白的提取与检测第37-38页
     ·酵母双杂交第38-42页
     ·免疫共沉淀第42页
     ·常规细胞培养及转染第42-43页
     ·小鼠整胚原位杂交第43-44页
     ·胚胎原位杂交预处理第44页
     ·小鼠胚胎的预杂交和杂交第44页
     ·胚胎杂交后的处理第44-45页
     ·抗体反应后漂洗和杂交信号的免疫检测第45-46页
     ·小鼠心肌细胞分离方法第46-47页
     ·免疫组化第47-49页
第三章 实验结果及其分析第49-62页
   ·人类AHNAKβ基因的生物信息学分析第49-53页
     ·AHNAKβ克隆和序列分析第49-51页
     ·AHNAKβ与AHNAKα的剪切方式比较第51-53页
   ·小鼠AHNAKβ基因的克隆第53-54页
   ·AHNAKβC蛋白表达及抗体制备第54-56页
     ·原核蛋白表达质粒构建第54页
     ·蛋白表达及纯化第54-55页
     ·AHNAKβ多克隆抗体制备第55-56页
   ·AHNAKβ基因在小鼠成体中的表达第56-57页
   ·AHNAKβ小鼠整体胚胎原位杂交结果第57-59页
   ·AHNAKβ小鼠整体胚胎免疫组化结果第59页
   ·小鼠原代培养细胞AHNAKβ的免疫荧光第59页
   ·免疫电镜实验结果第59-60页
   ·AHNAKβ酵母双杂交第60页
   ·用免疫共沉淀分析AHNAKβ与TNNI3的相互作用第60-62页
第四章 讨论第62-64页
   ·相互作用的探讨第62-63页
   ·TNNI3的功能第63-64页
总结第64页
展望第64-66页
参考文献第66-74页
附录第74-76页
致谢第76-77页

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