| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-12页 |
| 符号说明 | 第12-13页 |
| 第一部分 前言 | 第13-32页 |
| 1.真核启动子的概念,结构及分类 | 第13-32页 |
| ·启动子的概念 | 第13页 |
| ·真核启动子的结构模型 | 第13-14页 |
| ·启动子的分类 | 第14-27页 |
| ·组成型启动子 | 第14-15页 |
| ·诱导型启动子 | 第15-19页 |
| ·环境响应启动子 | 第15-16页 |
| ·真菌诱导表达启动子 | 第16页 |
| ·创伤诱导表达启动子 | 第16-17页 |
| ·植物激素诱导表达启动子 | 第17-19页 |
| ·组织特异性启动子 | 第19-27页 |
| ·根特异性启动子 | 第19-20页 |
| ·叶片特异表达启动子 | 第20-22页 |
| ·维管束特异表达启动子 | 第22-23页 |
| ·花器官特异表达启动子 | 第23页 |
| ·种子特异表达启动子 | 第23-25页 |
| ·果实特异表达启动子 | 第25-27页 |
| ·启动子克隆的方法 | 第27-31页 |
| ·利用启动子探针载体筛选启动子 | 第27-28页 |
| ·普通PCR克隆启动子 | 第28页 |
| ·以PCR技术为基础的技术克隆启动子 | 第28-31页 |
| ·环状PCR | 第29页 |
| ·利用载体或接头的染色体步行技术 | 第29-30页 |
| ·TAIL-PCR | 第30-31页 |
| ·本课题研究的目的意义 | 第31-32页 |
| 第二部分 材料与方法 | 第32-48页 |
| ·实验材料 | 第32页 |
| ·植物材料 | 第32页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第32-41页 |
| ·材料 | 第32-36页 |
| ·质粒 | 第32-33页 |
| ·菌株及培养基 | 第33-34页 |
| ·药品及试剂 | 第34页 |
| ·DY调控序列和HyPRP启动子片段的扩增 | 第34-36页 |
| ·质粒的重组和转化 | 第36-41页 |
| ·质粒DNA的制备和纯化 | 第36-37页 |
| ·质粒DNA的限制性酶切 | 第37页 |
| ·DNA片段的去磷酸化 | 第37页 |
| ·DNA片段的回收和定量 | 第37-38页 |
| ·目的DNA片段与载体DNA的连接 | 第38-39页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备和转化 | 第39页 |
| ·PCR扩增片段与T-Easy Vector的连接 | 第39-40页 |
| ·连接产物的转化和蓝白斑筛选重组子 | 第40页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第40-41页 |
| ·DY缺失突变体和HyPRP缺失突变植物表达载体的构建 | 第41页 |
| ·缺失突变体的获得 | 第41页 |
| ·转基因烟草的获得 | 第41-44页 |
| ·重组质粒转化根癌农杆菌 | 第41-42页 |
| ·根癌农杆菌转化烟草 | 第42页 |
| ·转基因烟草的PCR和Southern检测 | 第42-44页 |
| ·PCR检测 | 第42-43页 |
| ·Southern检测 | 第43-44页 |
| ·转基因烟草GUS酶活测定及组织化学检测 | 第44-46页 |
| ·转基因烟草GUS组织化学检测 | 第44页 |
| ·转基因烟草GUS酶活测定 | 第44-46页 |
| ·新鲜植物组织GUS蛋白的提取 | 第44-45页 |
| ·GUS蛋白提取液蛋白含量测定(Bradford法) | 第45页 |
| ·GUS酶活反应 | 第45页 |
| ·荧光测定 | 第45-46页 |
| ·酶活力计算 | 第46页 |
| ·草莓DY基因表达模式的RT-PCR分析 | 第46-48页 |
| ·草莓各组织总RNA的提取 | 第46-47页 |
| ·反转录体系 | 第47页 |
| ·Real-time RT-PCR | 第47-48页 |
| 第三部分 结果与分析 | 第48-67页 |
| ·DY基因的的表达模式 | 第48页 |
| ·DY和HyPRP基因调控序列的扩增 | 第48-52页 |
| ·DY基因调控序列的扩增 | 第48-52页 |
| ·HyPRP基因启动子片段的扩增 | 第52页 |
| ·草莓DY基因上游和HyPRP基因启动子序列的生物信息学分析 | 第52-56页 |
| ·草莓DY基因上游序列生物信息学分析 | 第52-54页 |
| ·草莓HyPRP基因启动子序列生物信息学分析 | 第54-56页 |
| ·启动子系列缺失突变体:GUS植物表达载体的构建 | 第56-59页 |
| ·DY基因启动子系列缺失突变体:GUS植物表达载体的构建 | 第56-58页 |
| ·DY基因启动子系列缺失突变体的构建策略 | 第56-57页 |
| ·pCAMBIA1305-DⅠ/DⅡ/DⅢ-GUS重组质粒的酶切鉴定 | 第57-58页 |
| ·HyPRP基因启动子系列缺失突变体:GUS植物表达载体的构建 | 第58-59页 |
| ·HyPRP基因启动子系列缺失突变体的构建策略 | 第58页 |
| ·启动子系列缺失突变体的克隆和酶切鉴定 | 第58-59页 |
| ·转基因烟草的分子生物学检测 | 第59-60页 |
| ·转基因烟草的PCR检测 | 第59-60页 |
| ·转基因烟草的Sourthern blotting分析 | 第60页 |
| ·烟草果实(子房)的发育过程 | 第60-61页 |
| ·转基因烟草GUS基因表达的组织化学检测 | 第61-63页 |
| ·转基因烟草果实(子房)GUS酶活测定 | 第63-67页 |
| ·转基因烟草果实(子房)各发育时期的GUS酶活测定 | 第63-65页 |
| ·PD系列转基因烟草果实(子房)各发育时期的GUS酶活测定 | 第63页 |
| ·PH系列转基因烟草果实(子房)各发育时期的GUS酶活测定 | 第63-65页 |
| ·PH和PD系列转基因株系间转基因烟草果实(子房)的GUS平均酶活性测定 | 第65-67页 |
| 第四部分 讨论 | 第67-71页 |
| ·DY基因启动子是一个果实特异表达的启动子 | 第67-68页 |
| ·HyPRP基因启动子是一个果实特异表达的启动子 | 第68-69页 |
| ·TAIL-PCR方法在启动子克隆上的应用 | 第69-71页 |
| 参考文献 | 第71-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第82页 |
