| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-40页 |
| 1 植酸及其性质 | 第13-17页 |
| ·植酸的发现 | 第13页 |
| ·植酸的结构 | 第13-14页 |
| ·植酸的理化性质 | 第14页 |
| ·植酸的分布 | 第14-15页 |
| ·植酸的抗营养作用及对环境的影响 | 第15-17页 |
| 2 植酸酶的来源 | 第17-19页 |
| 3 微生物植酸酶的生产 | 第19-25页 |
| ·植酸酶的酶活力定义 | 第19页 |
| ·植酸酶的酶活测定方法 | 第19-20页 |
| ·植酸酶的筛选和测定 | 第20页 |
| ·植酸酶的生产技术 | 第20-21页 |
| ·统计学优化方法在微生物发酵中的应用 | 第21-23页 |
| ·细菌的植酸酶 | 第23-24页 |
| ·酵母的植酸酶 | 第24页 |
| ·真菌的植酸酶 | 第24-25页 |
| 4 植酸酶的的分离纯化 | 第25-27页 |
| 5 植酸酶作用的影响因素 | 第27页 |
| 6 植酸酶的热稳定性 | 第27-28页 |
| 7 植酸酶基因工程研究现状 | 第28-33页 |
| ·植酸酶基因的克隆与表达 | 第28-30页 |
| ·植酸酶的基因表达系统 | 第30-33页 |
| ·E.coli 表达系统 | 第30-31页 |
| ·毕赤表达系统 | 第31-33页 |
| 8 植酸酶的应用 | 第33-35页 |
| ·植酸酶在饲料工业中的应用 | 第33-34页 |
| ·植酸酶在食品工业中的应用 | 第34-35页 |
| ·植酸酶在医学中的应用 | 第35页 |
| 9 海洋酵母研究进展 | 第35-38页 |
| 10 本论文的研究目的与意义 | 第38-39页 |
| 11 本论文研究和讨论的主要内容 | 第39-40页 |
| 第二章 海洋酵母KODAMAEA OHMERI BG3 液体发酵生产植酸酶的研究 | 第40-54页 |
| 1 前言 | 第40-41页 |
| 2 材料和方法 | 第41-46页 |
| ·材料 | 第41-42页 |
| ·菌株 | 第41页 |
| ·培养基 | 第41页 |
| ·植酸酶活性测定相关试剂的配制 | 第41-42页 |
| ·K. ohmeri BG3 的培养与植酸酶的制备 | 第42页 |
| ·植酸酶活性测定 | 第42页 |
| ·方法 | 第42-46页 |
| ·无机磷标准曲线的测定 | 第42页 |
| ·底物、碳源、氮源的优化 | 第42页 |
| ·筛选显著因子 | 第42-43页 |
| ·优化显著因子 | 第43-45页 |
| ·试验模型的验证 | 第45-46页 |
| ·不同底物含磷量的检测 | 第46页 |
| 3 结果和讨论 | 第46-53页 |
| ·无机磷标准曲线的绘制 | 第46-47页 |
| ·不同底物、碳源、氮源对酶活的影响 | 第47-48页 |
| ·筛选显著因子 | 第48-49页 |
| ·显著因子的优化 | 第49-51页 |
| ·验证模型的可行性 | 第51-52页 |
| ·不同底物含磷量的测定 | 第52-53页 |
| 4 本章小结 | 第53-54页 |
| 第三章 海洋酵母KODAMAEA OHMERI BG3液体发酵生产植酸酶及酶的分离纯化和特性研究 | 第54-71页 |
| 1 前言 | 第54-55页 |
| 2 材料和方法 | 第55-61页 |
| ·菌株 | 第55页 |
| ·培养基和试剂 | 第55-56页 |
| ·培养基 | 第55页 |
| ·试剂 | 第55-56页 |
| ·方法 | 第56-61页 |
| ·K. ohmeri BG3 产植酸酶 | 第56页 |
| ·植酸酶酶活测定 | 第56页 |
| ·植酸酶发酵液浓缩 | 第56-57页 |
| ·Sephadex~(TM) G-75 凝胶过滤 | 第57-58页 |
| ·DEAE-Sephorose Fast Flow 阴离子交换层析 | 第58页 |
| ·层析样品纯度测定 | 第58-59页 |
| ·纯化植酸酶最适反应温度和温度稳定性 | 第59-60页 |
| ·植酸酶最适反应pH 和pH 稳定性 | 第60页 |
| ·金属离子对植酸酶活性的影响 | 第60页 |
| ·蛋白抑制剂对植酸酶活性的影响 | 第60页 |
| ·动力学常数Km 和最大反应速度Vmax 的测定 | 第60-61页 |
| 3 结果与讨论 | 第61-69页 |
| ·植酸酶发酵液浓缩及SEPHRADEX~(TM) G-75 凝胶层析部分纯化 | 第61页 |
| ·DEAE-SEPHOROSE FAST FLOW 阴离子交换层析柱纯化 | 第61-62页 |
| ·植酸酶纯化过程参数和不连续SDS-PAGE 凝胶电泳 | 第62-64页 |
| ·纯化植酸酶最适温度和对温度的稳定性 | 第64-65页 |
| ·纯化植酸酶最适PH 和对PH 的稳定性 | 第65-66页 |
| ·金属离子对植酸酶酶活的影响 | 第66-67页 |
| ·蛋白抑制剂对纯化植酸酶酶活的影响 | 第67-68页 |
| ·动力学常数KM 和最大反应速度VMAX | 第68-69页 |
| 4 本章小结 | 第69-71页 |
| 第四章 KODAMAEA OHMERI BG3 植酸酶的基因克隆 | 第71-96页 |
| 1 引言 | 第71页 |
| 2 材料和方法 | 第71-79页 |
| ·菌株与质粒 | 第71-72页 |
| ·培养基和试剂 | 第72-73页 |
| ·培养基 | 第72页 |
| ·试剂 | 第72-73页 |
| ·方法 | 第73-79页 |
| ·K. ohmeri BG3 基因组DNA 的提取 | 第73页 |
| ·K. ohmeri BG3 总RNA 的提取 | 第73-74页 |
| ·植酸酶部分基因的克隆 | 第74-77页 |
| ·RACE | 第77页 |
| ·从基因组DNA 扩增植酸酶的基因 | 第77-78页 |
| ·植酸酶酶生物信息学分析 | 第78-79页 |
| 3 结果和讨论 | 第79-94页 |
| ·植酸酶部分基因的克隆 | 第79-82页 |
| ·简并引物的设计 | 第79-81页 |
| ·简并引物PCR 克隆植酸酶基因部分序列 | 第81-82页 |
| ·RACE | 第82-88页 |
| ·总RNA 的提取 | 第82-83页 |
| ·3’RACE PCR | 第83-84页 |
| ·5’RACE PCR | 第84-86页 |
| ·ORF 框的获得 | 第86-88页 |
| ·从基因组水平扩增植酸酶基因 | 第88-89页 |
| ·K. OHMERI BG3 植酸酶基因PHY1 序列分析 | 第89页 |
| ·K. OHMERI BG3 植酸酶氨基酸序列（PHY1）分析 | 第89-94页 |
| 4 本章小结 | 第94-96页 |
| 第五章 K. OHMERI BG3 植酸酶基因PHY1 在大肠杆菌中的表达 | 第96-110页 |
| 1 前言 | 第96页 |
| 2 材料和方法 | 第96-103页 |
| ·材料 | 第96-97页 |
| ·培养基和试剂 | 第97-98页 |
| ·培养基 | 第97页 |
| ·试剂 | 第97-98页 |
| ·方法 | 第98-103页 |
| ·pET-24a(+)PHY1 表达载体的构建 | 第98-100页 |
| ·pET-24a(+)PHY1 在大肠杆菌中的诱导表达 | 第100-102页 |
| ·重组植酸酶的性质 | 第102-103页 |
| 3 结果与讨论 | 第103-109页 |
| ·PET-24A(+)PHY1 表达载体的构建 | 第103-105页 |
| ·PET-24A(+)PHY1 在大肠杆菌中的诱导表达 | 第105-107页 |
| ·重组植酸酶的性质 | 第107-109页 |
| ·温度对重组植酸酶活性的影响 | 第107页 |
| ·pH 对重组植酸酶活性的影响 | 第107-108页 |
| ·重组植酸酶对植酸钠的水解实验 | 第108-109页 |
| 4 本章小结 | 第109-110页 |
| 参考文献 | 第110-125页 |
| 总结与创新点 | 第125-126页 |
| 附录 | 第126-127页 |
| 博士期间发表的学术论文 | 第127-128页 |
| 致谢 | 第128页 |
