| 中文摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 引言 | 第11-13页 |
| 第一部分 Hsf4b 真核表达载体的构建及其质粒上的定点突变 | 第13-33页 |
| 1 前言 | 第13-14页 |
| 2 材料与仪器 | 第14-19页 |
| ·菌种来源 | 第14页 |
| ·载体、细胞来源 | 第14页 |
| ·主要试剂 | 第14-15页 |
| ·主要溶液 | 第15-18页 |
| ·主要仪器设备 | 第18-19页 |
| 3 方法 | 第19-29页 |
| ·引物设计 | 第19-20页 |
| ·PCR 反应 | 第20页 |
| ·回收目的DNA | 第20-21页 |
| ·酶切、连接 | 第21页 |
| ·转化 | 第21-22页 |
| ·挑取及鉴定阳性克隆 | 第22页 |
| ·质粒提取及酶切鉴定 | 第22页 |
| ·定点突变 | 第22-24页 |
| ·细胞培养 | 第24页 |
| ·TRANS IT 转染MLEC 细胞 | 第24页 |
| ·收细胞及蛋白质印迹检测转染细胞中的标签蛋白 | 第24-29页 |
| 4 结果 | 第29-32页 |
| ·PCR 扩增 Hsf4b 全长基因 | 第29页 |
| ·真核表达载体的酶切鉴定 | 第29-30页 |
| ·Hsf4b 在 HEK 293T 细胞中的表达 | 第30页 |
| ·突变表达载体的构建与鉴定 | 第30-31页 |
| ·突变 Hsf4b 在 MLEC 细胞中的表达 | 第31-32页 |
| 5 讨论 | 第32-33页 |
| 第二部分 慢病毒载体 Plenti/Hsf4b 的构建及其稳定株的建立 | 第33-45页 |
| 1 前言 | 第33-34页 |
| 2 材料 | 第34-36页 |
| ·菌种来源 | 第34页 |
| ·载体、细胞来源 | 第34页 |
| ·试剂 | 第34-35页 |
| ·主要溶液 | 第35页 |
| ·主要仪器设备 | 第35-36页 |
| 3 方法 | 第36-40页 |
| ·慢病毒载体的构建 | 第36-38页 |
| ·病毒包装及感染MLEC 细胞 | 第38页 |
| ·Blasticidin 的浓度筛选 | 第38-39页 |
| ·Hsf4b 稳定表达细胞株的筛选 | 第39页 |
| ·免疫印迹技术（Western blotting）检测感染细胞中的标签蛋白 | 第39-40页 |
| 4 结果 | 第40-42页 |
| ·慢病毒表达载体的构建及酶切鉴定 | 第40-41页 |
| ·表达 Hsf4b 慢病毒载体稳定细胞株的建立及鉴定 | 第41-42页 |
| ·Western Blot 检测下游蛋白的表达 | 第42页 |
| 5 讨论 | 第42-45页 |
| 结论 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-49页 |
| 综述 | 第49-61页 |
| 附录 | 第61-62页 |
| 在读期间发表的学术论文与研究成果 | 第62-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
