| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 1 文献综述 | 第13-23页 |
| 1.1 前言 | 第13-14页 |
| 1.2 植物面对的胁迫 | 第14-17页 |
| 1.2.1 温度对植物的影响 | 第14页 |
| 1.2.2 植物对温度的感应 | 第14-16页 |
| 1.2.3 高温胁迫与分子伴侣 | 第16-17页 |
| 1.3 热激蛋白以及热激转录因子 | 第17-20页 |
| 1.4 真核生物的剪接 | 第20-22页 |
| 1.4.1 真核生物RNA聚合酶 | 第20页 |
| 1.4.2 选择性剪接 | 第20-21页 |
| 1.4.3 选择性剪接和高温胁迫 | 第21-22页 |
| 1.5 立题依据 | 第22-23页 |
| 2 实验材料和方法 | 第23-42页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-24页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第23页 |
| 2.1.2 菌株和载体质粒 | 第23-24页 |
| 2.2 实验仪器 | 第24-25页 |
| 2.3 实验试剂 | 第25-28页 |
| 2.3.1 常用试剂 | 第25页 |
| 2.3.2 试剂溶液 | 第25-27页 |
| 2.3.3 抗生素 | 第27页 |
| 2.3.4 培养基 | 第27-28页 |
| 2.4 实验方法 | 第28-40页 |
| 2.4.1 拟南芥的培养和种植 | 第28页 |
| 2.4.2 拟南芥DNA粗提液的提取 | 第28页 |
| 2.4.3 图位克隆 | 第28-30页 |
| 2.4.4 拟南芥的杂交 | 第30页 |
| 2.4.5 拟南芥RNA的提取(Trizol) | 第30-31页 |
| 2.4.6 拟南芥RNA的提取(冷酚法) | 第31页 |
| 2.4.7 RNA的反转录 | 第31-32页 |
| 2.4.8 拟南芥完整基因组DNA的提取 | 第32-33页 |
| 2.4.9 常规载体构建 | 第33-34页 |
| 2.4.10 Gateway克隆技术构建载体 | 第34-35页 |
| 2.4.11 大肠杆菌(DH5α)感受态的制备和转化 | 第35-36页 |
| 2.4.12 碱裂解法提取质粒 | 第36页 |
| 2.4.13 农杆菌感受态的制备与转化 | 第36-37页 |
| 2.4.14 拟南芥花序侵染 | 第37页 |
| 2.4.15 转基因植株的筛选 | 第37页 |
| 2.4.16 GUS染色 | 第37-38页 |
| 2.4.17 烟草的农杆菌侵染 | 第38-39页 |
| 2.4.18 Western-Botting | 第39-40页 |
| 2.4.19 T-DNA突变体的鉴定 | 第40页 |
| 2.4.20 DAPI染色 | 第40页 |
| 2.5 生物学软件和相关网站 | 第40-42页 |
| 3 实验结果与分析 | 第42-67页 |
| 3.1 突变体背景介绍 | 第42-43页 |
| 3.2 突变体hl761的表型 | 第43-46页 |
| 3.2.1 突变体hl761对高温敏感 | 第43-44页 |
| 3.2.2 突变体hl761对冻害敏感 | 第44-45页 |
| 3.2.3 突变体hl761生长上的表型 | 第45-46页 |
| 3.3 突变体hl761中突变位点的定位与鉴定 | 第46-48页 |
| 3.4 SAPH2的基因分析和蛋白质分析 | 第48-49页 |
| 3.5 突变体hl761的图位克隆结果的验证 | 第49-50页 |
| 3.6 突变体hl761互补材料的实验结果 | 第50-57页 |
| 3.6.1 互补载体的构建 | 第50-51页 |
| 3.6.2 转基因材料的创建 | 第51-52页 |
| 3.6.3 转入野生型基因能够互补突变体hl761的LUC化学发光表型 | 第52-55页 |
| 3.6.4 转入野生型基因能够互补突变体hl761生长发育方面的表型 | 第55-56页 |
| 3.6.5 转入野生型基因能够互补突变体hl761高温敏感的表型 | 第56-57页 |
| 3.7 SAPH2基因的表达分析 | 第57-60页 |
| 3.7.1 SAPH2基因的组织表达分析 | 第57-58页 |
| 3.7.2 SAPH2基因启动子的GUS报告基因染色分析 | 第58-59页 |
| 3.7.3 高温影响SAPH2基因的表达 | 第59-60页 |
| 3.8 SAPH2蛋白的亚细胞定位 | 第60-61页 |
| 3.8.1 SAPH2蛋白在烟草中的亚细胞定位 | 第60页 |
| 3.8.2 SAPH2蛋白在拟南芥中的亚细胞定位 | 第60-61页 |
| 3.9 热激反应相关基因的转录分析 | 第61-67页 |
| 3.9.1 SAPH2基因突变导致38℃条件下突变体hl761中HSP18.2表达水平相对较低 | 第61-62页 |
| 3.9.2 拟南芥转录组分析 | 第62-63页 |
| 3.9.3 拟南芥转录组分析的结果验证 | 第63-67页 |
| 4 讨论 | 第67-71页 |
| 4.1 突变的SAPH2能够增强LUC化学发光水平 | 第67页 |
| 4.2 SAPH2蛋白质定位于细胞核 | 第67页 |
| 4.3 突变的SAPH2导致植物对高温敏感 | 第67-68页 |
| 4.4 突变体hl761中热激响应降低可能是高温敏感表型的原因 | 第68-69页 |
| 4.5 突变体hl761的后续研究方向 | 第69-71页 |
| 参考文献 | 第71-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
