| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 缩略词表 | 第11-12页 |
| 第一章 文章综述 | 第12-19页 |
| 1 产气荚膜梭菌简介 | 第12-13页 |
| 2 A型产气荚膜梭菌在猪群中的流行性及与疾病的相关性 | 第13页 |
| 3 产气荚膜梭菌的鉴定及毒素分型 | 第13-14页 |
| 4 产气荚膜梭菌β2毒素研究进展 | 第14-16页 |
| 4.1 β2毒素分子结构特征 | 第14页 |
| 4.2 β2毒素基因的研究进展 | 第14-15页 |
| 4.3 β2毒素生物学特性 | 第15-16页 |
| 4.4 携带β2毒素的A型CP菌株在猪群中的流行性及与疾病的相关性 | 第16页 |
| 5 仔猪肠道菌群发育及功能 | 第16-17页 |
| 6 高通量技术在微生物从头测序上的应用 | 第17页 |
| 7 酵母双杂交技术在毒素与宿主蛋白之间的应用 | 第17-18页 |
| 8 本试验研究目的及意义 | 第18-19页 |
| 第二章 试验部分 | 第19-46页 |
| 试验一 产荚膜梭菌的分离及筛选 | 第19-29页 |
| 1 材料与方法 | 第19-22页 |
| 1.1 试验菌株、载体和动物 | 第19页 |
| 1.2 主要实验仪器和试剂 | 第19-20页 |
| 1.2.1 主要实验仪器 | 第19-20页 |
| 1.2.2 主要试验试剂 | 第20页 |
| 1.3 江西地区仔猪Cp的初分离 | 第20-21页 |
| 1.3.1 样品采集及Cp的分离 | 第20页 |
| 1.3.2 分离菌株生化鉴定及16SrRNA鉴定 | 第20-21页 |
| 1.3.3 多重PCR毒素基因分型 | 第21页 |
| 1.3.4 CpA分离率及β2毒素携带率统计 | 第21页 |
| 1.4 CpA菌株质粒提取及CPE毒素基因的检测 | 第21页 |
| 1.5 携带β2毒素CpA小鼠毒性试验 | 第21-22页 |
| 1.6 携带β2毒素CpA兔回肠结扎试验 | 第22页 |
| 2 结果 | 第22-27页 |
| 2.1 细菌分离、生化鉴定及16SrDNA鉴定结果 | 第22-23页 |
| 2.2 分离菌株毒素分型及β2毒素检测 | 第23-24页 |
| 2.3 CpA分离菌株质粒提取及CPE毒素检测 | 第24-25页 |
| 2.4 携带β2毒素CpA小鼠试验结果 | 第25-26页 |
| 2.5 携带β2毒素CpA兔回肠结扎试验结果 | 第26-27页 |
| 3 分析与讨论 | 第27-29页 |
| 3.1 产气荚膜梭菌的分离 | 第27页 |
| 3.2 β2毒素携带率及毒素研究 | 第27-29页 |
| 试验二 JXJA17CpA(β2+)江西分离株基因组从头测序分析 | 第29-38页 |
| 1 材料与方法 | 第29-30页 |
| 1.1 菌株准备 | 第29页 |
| 1.2 全基因组序列测序、拼装与分析 | 第29-30页 |
| 1.3 抗生素抗性与原噬菌体分析 | 第30页 |
| 1.4 共线性分析 | 第30页 |
| 1.5 进化树构建分析 | 第30页 |
| 1.6 β2毒素基因及其他毒力因子(VFDB)分析 | 第30页 |
| 2 结果 | 第30-36页 |
| 2.1 JXJA17菌株准备 | 第30-31页 |
| 2.2 JXJA17基因预测和注释 | 第31-33页 |
| 2.3 抗生素抗性与原噬菌体分析 | 第33-34页 |
| 2.4 共线性分析 | 第34-35页 |
| 2.5 β2毒素基因及其他毒力因子分析 | 第35-36页 |
| 2.6 质粒P1~9分析 | 第36页 |
| 3 分析与讨论 | 第36-38页 |
| 试验三 β2毒素酵母双杂交试验 | 第38-46页 |
| 1 试验材料与方法 | 第38-41页 |
| 1.1 试验材料 | 第38页 |
| 1.2 方法 | 第38-41页 |
| 1.2.1 文库构建及评价 | 第38页 |
| 1.2.2 菌株DNA提取及β2毒素基因引物设计 | 第38-39页 |
| 1.2.3 PCR反应 | 第39页 |
| 1.2.4 PMD18-T重组质粒构建与转化 | 第39页 |
| 1.2.5 诱饵质粒BD-53-β2的构建 | 第39页 |
| 1.2.6 诱饵质粒酵母转化 | 第39-40页 |
| 1.2.7 酵母毒性鉴定 | 第40页 |
| 1.2.8 酵母细胞PCR鉴定 | 第40页 |
| 1.2.9 酵母重组蛋白表达及抽提 | 第40页 |
| 1.2.10 SDS-PAGE分析 | 第40页 |
| 1.2.11 WesternBlot鉴定重组蛋白 | 第40页 |
| 1.2.12 筛选猪肠上皮细胞文库中与β2毒素相互作用的蛋白 | 第40-41页 |
| 1.2.13 阳性克隆的筛选及测序分析 | 第41页 |
| 2 试验结果 | 第41-45页 |
| 2.1 诱饵质粒pGBKT7-β2的构建 | 第41-45页 |
| 2.1.1 目的基因的PCR扩增与测序分析 | 第41-42页 |
| 2.1.2 诱饵质粒pGBKT7-β2的构建 | 第42页 |
| 2.1.3 诱饵质粒pGBKT7-β2对酵母生长的毒性作用 | 第42-43页 |
| 2.1.4 诱饵质粒pGBKT7-β毒素蛋白表达 | 第43页 |
| 2.1.5 Western-blot鉴定目的基因表达 | 第43-44页 |
| 2.1.6 酵母双杂交筛选 | 第44-45页 |
| 3 讨论与分析 | 第45-46页 |
| 全文总结 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
| 作者简历 | 第53页 |
