| 摘要 | 第3-6页 |
| Abstract | 第6-9页 |
| 缩略词表(Abbreviation) | 第10-16页 |
| 前言 | 第16-19页 |
| 第一部分 miR-320a对肺腺癌细胞生长及辐射敏感性影响的研究 | 第19-30页 |
| 第一章 实验材料 | 第19-20页 |
| 1.1 细胞系、组织标本 | 第19页 |
| 1.2 主要试剂 | 第19页 |
| 1.3 主要仪器 | 第19-20页 |
| 1.4 常用试剂的配制 | 第20页 |
| 第二章 实验方法 | 第20-25页 |
| 2.1 qRT-PCR检测miR-320a在癌旁组织和癌组织中表达 | 第20-23页 |
| 2.2 LTEP-a-2细胞的前期复苏、传代、冻存 | 第23-24页 |
| 2.3 qRT-PCR检测miR-320a转染效率 | 第24页 |
| 2.4 转染及X射线照射后MTT检测LTEP-a-2细胞的活力 | 第24-25页 |
| 2.5 转染及X射线照射后Annexin V-FITC/PI双染检测LTEP-a-2细胞凋亡率 | 第25页 |
| 第三章 实验结果 | 第25-29页 |
| 3.1 miR-320a在癌组织表达量低于癌旁组织 | 第25-26页 |
| 3.2 qRT-PCR检测miR-320a转染效率 | 第26页 |
| 3.3 miR-320a对LTEP-a-2细胞增殖、凋亡及辐射敏感性的影响 | 第26-28页 |
| 3.4 miR-320a对A549/34R细胞增殖、凋亡及辐射敏感性的影响 | 第28-29页 |
| 第四章 讨论 | 第29-30页 |
| 第二部分 miR-320a抑制肺腺癌细胞生长的机制研究 | 第30-62页 |
| Part Ⅰ miR-320a调节STAT3表达 | 第30-43页 |
| 第一章 实验材料 | 第30-32页 |
| 1.1 研究对象 | 第30页 |
| 1.2 主要载体 | 第30页 |
| 1.3 主要试剂 | 第30-31页 |
| 1.4 主要仪器 | 第31页 |
| 1.5 常用试剂配制 | 第31-32页 |
| 第二章 实验方法 | 第32-41页 |
| 2.1 microRNA信息分析软件分析miR-320a上STAT3-3UTR作用位点 | 第33页 |
| 2.2 pcDNA-GFP-STAT3-3'UTR载体构建和提取 | 第33-38页 |
| 2.3 pcDNA-GFP-STAT3-3'UTR载体和miR-320a共转染细胞 | 第38页 |
| 2.4 荧光显微镜和流式细胞仪检测GFP的表达情况 | 第38-39页 |
| 2.5 Western blotting检测miR-320a转染后STAT3/p-STAT3表达变化 | 第39-40页 |
| 2.6 免疫荧光实验检测miR-320a转染后p-STAT3在细胞中表达情况 | 第40-41页 |
| 第三章 实验结果 | 第41-43页 |
| 3.1 STAT3基因上存在miR-320a作用位点 | 第41-42页 |
| 3.2 miR-320a抑制STAT3/p-STAT3表达 | 第42-43页 |
| Part Ⅱ miR-320a调节STAT3下游基因表达 | 第43-51页 |
| 第一章 实验材料 | 第43-44页 |
| 1.1 研究对象 | 第43页 |
| 1.2 主要试剂 | 第43页 |
| 1.3 主要仪器 | 第43-44页 |
| 1.4 常用试剂配制 | 第44页 |
| 第二章 实验方法 | 第44-47页 |
| 2.1 qRT-PCR检测miR-320a在细胞中表达情况 | 第44页 |
| 2.2 Western blotting检测STAT3/p-STAT3在细胞中表达情况 | 第44页 |
| 2.3 免疫荧光实验检p-STAT3在细胞核中表达情况 | 第44-45页 |
| 2.4 Western blotting检测Bax/Bcl2在细胞表达情况 | 第45页 |
| 2.5 qRT-PCR检测转染细胞中Bax/Bcl2表达情况 | 第45-46页 |
| 2.6 Western blotting检测转染细胞中STAT3下游基因表达情况 | 第46-47页 |
| 第三章 实验结果 | 第47-50页 |
| 3.1 miR-320a和STAT3/p-STAT3在细胞中表达呈负相关 | 第47-48页 |
| 3.2 A549/34R细胞核中p-STAT3表达量高于A549细胞 | 第48-49页 |
| 3.3 Bax/Bcl2在A549/34R和A549细胞中表达结果 | 第49-50页 |
| 3.4 miR-320a调节STAT3相关基因表达 | 第50-51页 |
| Part Ⅲ SiRNA抑制STAT3信号通路 | 第51-58页 |
| 第一章 实验材料 | 第51-52页 |
| 1.1 研究对象 | 第51页 |
| 1.2 主要试剂 | 第51页 |
| 1.3 主要仪器 | 第51-52页 |
| 第二章 实验方法 | 第52-54页 |
| 2.1 qRT-PCR筛选有效干扰STAT3的siRNA | 第52-53页 |
| 2.2 免疫荧光实验检测转染STAT3-siRNA1后p-STAT3核内表达变化 | 第53页 |
| 2.3 MTT和细胞凋亡实验检测细胞活力和细胞凋亡率 | 第53页 |
| 2.4 qRT-PCR和western blot检测STAT3下游基因表达 | 第53-54页 |
| 第三章 实验结果 | 第54-58页 |
| 3.1 STAT3对A549/34R细胞增殖、凋亡及辐射耐受性的影响 | 第54-57页 |
| 3.2 SiRNA干扰STAT3表达对STAT3相关信号因子表达的影响 | 第57-58页 |
| Part Ⅳ miR-320a抑制细胞生长的体内实验研究 | 第58-62页 |
| 第一章 实验材料 | 第58-59页 |
| 1.1 研究对象 | 第58页 |
| 1.2 主要试剂 | 第58页 |
| 1.3 主要仪器 | 第58-59页 |
| 第二章 实验方法 | 第59页 |
| 2.1 裸鼠造瘤实验 | 第59页 |
| 2.2 Western blot检测移植瘤中STAT3及相关基因表达情况 | 第59-60页 |
| 第三章 实验结果 | 第60-62页 |
| 3.1 裸鼠移植瘤生长情况 | 第60-61页 |
| 3.2 Western blot检测移植瘤中STAT3及相关基因表达情况 | 第61-62页 |
| 第三部分 miR-320a和STAT3对细胞迁移的影响 | 第62-69页 |
| 第一章 实验材料 | 第62页 |
| 1.1 研究对象 | 第62页 |
| 1.2 主要试剂 | 第62页 |
| 1.3 主要仪器 | 第62页 |
| 第二章 实验方法 | 第62-64页 |
| 2.1 转染及X射线照射后细胞迁移实验检测细胞迁移情况 | 第62-63页 |
| 2.2 裸鼠体内肺转移实验 | 第63-64页 |
| 第三章 实验结果 | 第64-67页 |
| 3.1 miR-320a和STAT3-siRNA1抑制细胞迁移 | 第64-65页 |
| 3.2 裸鼠体内肺转移实验结果 | 第65-66页 |
| 3.3 HE染色实验检测转移灶结果 | 第66页 |
| 3.4 免疫组化实验检测CD44表达结果 | 第66-67页 |
| 3.5 STAT3在肺腺癌组织中表达高于癌旁组织 | 第67页 |
| 第四章 讨论 | 第67-69页 |
| 小结与后期计划 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-73页 |
| 文献综述 | 第73-81页 |
| 参考文献 | 第78-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
| 研究生期间发表的文章 | 第82页 |
