| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 缩略词表 | 第10-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-25页 |
| 1.1 水稻免疫机制研究进展 | 第12-18页 |
| 1.1.1 植物免疫机制概述 | 第12-13页 |
| 1.1.2 PAMP触发的免疫反应(PTI) | 第13-15页 |
| 1.1.2.1 鞭毛蛋白-OsFLS2介导的免疫 | 第14-15页 |
| 1.1.2.2 细菌延伸因子-EFR介导的免疫 | 第15页 |
| 1.1.2.3 几丁质-LysM结构蛋白介导的免疫 | 第15页 |
| 1.1.3 效应蛋白抑制PTI信号途径 | 第15-16页 |
| 1.1.4 效应蛋白触发的免疫反应(ETI) | 第16-18页 |
| 1.2 水稻主要病害研究概况 | 第18-20页 |
| 1.2.1 水稻主要细菌性病害 | 第18-20页 |
| 1.2.1.1 水稻白叶枯病 | 第18页 |
| 1.2.1.2 水稻细菌性条斑病 | 第18-19页 |
| 1.2.1.3 水稻细菌性褐条病 | 第19-20页 |
| 1.2.2 水稻主要真菌性病害 | 第20页 |
| 1.2.2.1 水稻稻瘟病 | 第20页 |
| 1.2.2.2 水稻纹枯病 | 第20页 |
| 1.2.2.3 水稻稻曲病 | 第20页 |
| 1.3 水稻抗病育种研究概况 | 第20-22页 |
| 1.4 EF-Tu与EFR研究概况 | 第22-24页 |
| 1.4.1 EF-Tu作为PAMP的首次发现 | 第22页 |
| 1.4.2 模式识别受体AtEFR的发现 | 第22-23页 |
| 1.4.3 AtEFR转基因烟草和番茄的抗病性研究 | 第23-24页 |
| 1.5 本研究的目的和意义 | 第24-25页 |
| 第二章 水稻中表达AtEFR对细菌延伸因子EF-Tu识别的研究 | 第25-48页 |
| 2.1 实验材料 | 第25-30页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第25页 |
| 2.1.2 菌株和引物 | 第25-26页 |
| 2.1.3 培养基和溶液 | 第26-30页 |
| 2.1.3.1 用于培养水稻悬浮细胞的培养基 | 第26-27页 |
| 2.1.3.2 用于Western blot的溶液 | 第27-29页 |
| 2.1.3.3 用于Southern blot的溶液 | 第29页 |
| 2.1.3.4 其它培养基 | 第29-30页 |
| 2.2 实验方法 | 第30-37页 |
| 2.2.1 植物培养 | 第30页 |
| 2.2.2 水稻悬浮细胞培养 | 第30页 |
| 2.2.3 水稻基因组提取(TPS法) | 第30页 |
| 2.2.4 水稻总RNA提取和荧光定量PCR | 第30-32页 |
| 2.2.4.1 水稻总RNA提取 | 第30-31页 |
| 2.2.4.2 RNA反转录 | 第31页 |
| 2.2.4.3 目的基因的扩增 | 第31-32页 |
| 2.2.4.4 荧光定量PCR检测转基因水稻病程相关基因表达 | 第32页 |
| 2.2.5 水稻总蛋白提取 | 第32页 |
| 2.2.6 Western blot检测 | 第32-33页 |
| 2.2.7 CTAB法大量提取水稻基因组 | 第33-34页 |
| 2.2.8 突变体Southern blot验证 | 第34-35页 |
| 2.2.9 水稻氧爆发测定 | 第35-36页 |
| 2.2.9.1 水稻悬浮细胞氧爆发测定 | 第35-36页 |
| 2.2.9.2 水稻叶片氧爆发测定 | 第36页 |
| 2.2.10 AtEFR转基因水稻抗病性分析 | 第36-37页 |
| 2.2.10.1 AtEFR转基因水稻对白叶枯病抗性分析 | 第36页 |
| 2.2.10.2 AtEFR转基因水稻对水稻细菌性褐条病抗性分析 | 第36-37页 |
| 2.2.10.3 AtEFR转基因水稻对稻瘟病抗性分析 | 第37页 |
| 2.3 结果与分析 | 第37-46页 |
| 2.3.1 水稻病原细菌elf18和其它病原细菌ef18的序列比对 | 第37-38页 |
| 2.3.2 野生型水稻不能识别水稻病原细菌的elf18 | 第38-39页 |
| 2.3.3 AtEFR转基因水稻的获得及纯合体鉴定 | 第39-40页 |
| 2.3.3.1 AtEFR转基因水稻的获得 | 第39页 |
| 2.3.3.2 AtEFR转基因水稻纯合体的鉴定 | 第39-40页 |
| 2.3.4 AtEFR转基因水稻转录和蛋白表达水平检测 | 第40-41页 |
| 2.3.4.1 AtEFR转基因水稻转录水平检测 | 第40页 |
| 2.3.4.2 AtEFR转基因水稻蛋白表达水平检测 | 第40-41页 |
| 2.3.5 AtEFR转基因水稻的农艺学性状分析 | 第41页 |
| 2.3.6 elf18诱导AtEFR转基因水稻悬浮细胞强烈的氧爆发 | 第41-42页 |
| 2.3.7 elf18诱导AtEFR转基因水稻病程相关基因的表达上调 | 第42-43页 |
| 2.3.8 elf18诱导AtEFR转基因水稻成熟叶片MAPK磷酸化 | 第43-44页 |
| 2.3.9 AtEFR转基因水稻抗病性检测 | 第44-46页 |
| 2.3.9.1 elf18预处理增强AtEFR转基因水稻对PX099A的抗病性 | 第44-45页 |
| 2.3.9.2 AtEFR转基因水稻对细菌性褐条病的抗性增强 | 第45页 |
| 2.3.9.3 AtEFR转基因水稻对稻瘟菌的抗病性没有变化 | 第45-46页 |
| 2.4 小结与讨论 | 第46-48页 |
| 第三章 水稻内源受体对细菌延伸因子EF-Tu识别的研究 | 第48-66页 |
| 3.1 实验材料 | 第48-53页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第48页 |
| 3.1.2 菌株和质粒 | 第48-49页 |
| 3.1.3 引物序列 | 第49-52页 |
| 3.1.4 培养基和溶液 | 第52-53页 |
| 3.2 实验方法 | 第53-58页 |
| 3.2.1 细菌基因组DNA的提取 | 第53-54页 |
| 3.2.2 用于原核表达的载体构建 | 第54-55页 |
| 3.2.2.1 目的基因的扩增 | 第54页 |
| 3.2.2.2 目的片段的纯化回收 | 第54页 |
| 3.2.2.3 目的基因与pGEX-4T-3的连接与转化 | 第54-55页 |
| 3.2.2.4 质粒DNA的提取 | 第55页 |
| 3.2.3 融合蛋白的表达及可溶性检测 | 第55-56页 |
| 3.2.3.1 小量法检测蛋白表达 | 第55-56页 |
| 3.2.3.2 蛋白可溶性检测 | 第56页 |
| 3.2.4 融合蛋白的纯化 | 第56-57页 |
| 3.2.4.1 GST融合蛋白的树脂层析纯化 | 第56页 |
| 3.2.4.2 His融合蛋白的树脂层析纯化 | 第56-57页 |
| 3.2.4.3 融合蛋白透析纯化 | 第57页 |
| 3.2.4.4 融合蛋白过分子筛纯化 | 第57页 |
| 3.2.5 BCA法测蛋白浓度 | 第57-58页 |
| 3.2.6 水稻愈伤氧爆发的测定 | 第58页 |
| 3.3 结果与分析 | 第58-65页 |
| 3.3.1 水稻病原细菌的EF-Tu蛋白可以诱导水稻氧爆发 | 第58-59页 |
| 3.3.2 PX099A的1-175位和226-396位EF-Tu蛋白截断体可以诱导水稻氧爆发 | 第59-60页 |
| 3.3.3 PX099A的226-316位EF-Tu蛋白截断体诱导水稻氧爆发 | 第60-61页 |
| 3.3.4 PX099A的226-300位EF-Tu蛋白截断体诱导水稻氧爆发 | 第61-62页 |
| 3.3.5 PX099A的246-280位蛋白截断体诱导水稻氧爆发 | 第62-63页 |
| 3.3.6 Pst DC3000和Aa RS-1的246-280位蛋白截断体不能诱导水稻氧爆发 | 第63-65页 |
| 3.4 小结与讨论 | 第65-66页 |
| 第四章 全文总结与研究展望 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-75页 |
| 附录 水稻MAPKKs与MAPKs互作蛋白的筛选与鉴定 | 第75-110页 |
| 参考文献 | 第107-110页 |
| 致谢 | 第110-111页 |
| 作者简介 | 第111页 |
