| 摘要 | 第10-14页 |
| Abstract | 第14-18页 |
| 符号说明 | 第19-20页 |
| 第一章 绪论 | 第20-32页 |
| 1 甘油的生产与应用 | 第20-24页 |
| 1.1 甘油的生产 | 第20-21页 |
| 1.2 甘油的应用 | 第21-24页 |
| 2 1,3-丙二醇的应用与生物合成 | 第24-28页 |
| 2.1 1,3-丙二醇的应用 | 第24页 |
| 2.2 1,3-丙二醇的化学合成 | 第24-25页 |
| 2.3 1,3-丙二醇的生产菌株和合成途径 | 第25-26页 |
| 2.4 代谢工程在1,3-丙二醇生产中的应用 | 第26-28页 |
| 3 乳酸的应用与生物合成 | 第28-30页 |
| 3.1 乳酸的应用 | 第28-29页 |
| 3.2 乳酸的生产菌株和合成途径 | 第29-30页 |
| 4 本论文的立题背景及主要研究内容 | 第30-32页 |
| 4.1 立题背景 | 第30页 |
| 4.2 主要研究内容 | 第30-32页 |
| 第二章 1,3-丙二醇生产菌基因组测序及dha基因簇序列分析 | 第32-46页 |
| 1 前言 | 第32-33页 |
| 2 材料与方法 | 第33-38页 |
| 2.1 主要试剂 | 第33页 |
| 2.2 主要仪器 | 第33页 |
| 2.3 菌株筛选及培养方法 | 第33-35页 |
| 2.4 基因组提取及测序 | 第35-37页 |
| 2.5 基因组序列的拼接 | 第37页 |
| 2.6 基因组序列的注释 | 第37-38页 |
| 3 结果和讨论 | 第38-43页 |
| 3.1 三株1,3-丙二醇生产菌株的基因组测序和拼接 | 第38页 |
| 3.2 三株1,3-丙二醇生产菌株基因组序列的注释和分析 | 第38-40页 |
| 3.3 不同来源的dha基因簇比较分析 | 第40-43页 |
| 3.4 1,3-丙二醇合成关键酶的进化树分析 | 第43页 |
| 4 本章小结 | 第43-46页 |
| 第三章 代谢工程改造产酸克雷伯氏菌联产D-乳酸和1,3-丙二醇 | 第46-88页 |
| 1 前言 | 第46-47页 |
| 2 材料与方法 | 第47-60页 |
| 2.1 主要试剂 | 第47页 |
| 2.2 主要仪器 | 第47-48页 |
| 2.3 菌株及培养方法 | 第48-51页 |
| 2.4 E.coli感受态的制备方法 | 第51-52页 |
| 2.5 E.coli转化方法 | 第52页 |
| 2.6 K.oxytoca基因敲除质粒pKR6K_(Cm)的构建 | 第52-53页 |
| 2.7 K.oxytoca中敲除基因 | 第53-58页 |
| 2.8 分批补料发酵 | 第58-59页 |
| 2.9 分批补料发酵条件优化 | 第59页 |
| 2.10 发酵底物、产物及副产物分析 | 第59-60页 |
| 3 结果与讨论 | 第60-86页 |
| 3.1 K.oxytoca PDL-0的甘油发酵及产物分析 | 第60-61页 |
| 3.2 联产产物的选择 | 第61-65页 |
| 3.3 突变株PDL-1的构建 | 第65-69页 |
| 3.4 突变株PDL-1的甘油代谢分析 | 第69-70页 |
| 3.5 突变株PDL-2的构建 | 第70-72页 |
| 3.6 突变株PDL-2的甘油代谢分析 | 第72-73页 |
| 3.7 突变株PDL-3的构建 | 第73-74页 |
| 3.8 突变株PDL-3的甘油代谢分析 | 第74-75页 |
| 3.9 突变株PDL-4的构建 | 第75-77页 |
| 3.10 突变株PDL-4的甘油代谢分析 | 第77页 |
| 3.11 突变株PDL-5的构建 | 第77-79页 |
| 3.12 突变株PDL-5的甘油代谢分析 | 第79-80页 |
| 3.13 突变株PDL-6的构建 | 第80-81页 |
| 3.14 突变株PDL-6的甘油代谢分析 | 第81-83页 |
| 3.15 联产1,3-丙二醇及D-乳酸的发酵条件优化 | 第83-84页 |
| 3.16 分批补料发酵联产1,3-丙二醇及D-乳酸 | 第84-86页 |
| 4 本章小结 | 第86-88页 |
| 第四章 利用代谢工程改造的产酸克雷伯氏菌联产L-乳酸和1,3-丙二醇 | 第88-114页 |
| 1 前言 | 第88-90页 |
| 2 材料与方法 | 第90-97页 |
| 2.1 主要试剂 | 第90页 |
| 2.2 主要仪器 | 第90页 |
| 2.3 菌株及培养方法 | 第90-93页 |
| 2.4 K.oxytoca基因组中替换基因 | 第93-94页 |
| 2.5 K.oxytoca感受态制备及电转方法 | 第94-95页 |
| 2.6 乳酸脱氢酶酶活测定 | 第95-96页 |
| 2.7 粗酶液总蛋白测定 | 第96页 |
| 2.8 组成型表达L-乳酸脱氢酶菌株的构建 | 第96-97页 |
| 2.9 分批补料发酵 | 第97页 |
| 3 结果与讨论 | 第97-110页 |
| 3.1 K.oxytoca PDL-5基因组水平上ldhL置换ldhD | 第97-99页 |
| 3.2 突变株PDL-7的甘油代谢分析 | 第99-101页 |
| 3.3 表达不同来源的L-乳酸脱氢酶的菌株构建 | 第101-105页 |
| 3.4 不同来源的L-乳酸脱氢酶的工作效果检测 | 第105页 |
| 3.5 组成型表达B.coagulans 2-6来源的L-乳酸脱氢酶 | 第105-108页 |
| 3.6 突变株PLL分批发酵联产L-乳酸和1,3-PD | 第108页 |
| 3.7 突变株PLL分批补料发酵联产L-乳酸和1,3-PD | 第108-110页 |
| 4 本章小结 | 第110-114页 |
| 第五章 二醇梭菌共发酵木质纤维素水解液和甘油高转化率生产1,3-丙二醇 | 第114-140页 |
| 1 前言 | 第114-115页 |
| 2 材料与方法 | 第115-122页 |
| 2.1 主要试剂 | 第115-116页 |
| 2.2 主要仪器 | 第116页 |
| 2.3 菌株及培养方法 | 第116-117页 |
| 2.4 分批共发酵甘油和糖 | 第117-118页 |
| 2.5 分批补料共发酵甘油与玉米秸秆水解液 | 第118页 |
| 2.6 分析测试方法 | 第118页 |
| 2.7 dhaB1、dhaD及dhaT转录水平分析 | 第118-120页 |
| 2.8 胞内NADH/NAD~+水平变化检测 | 第120-122页 |
| 3 结果与讨论 | 第122-138页 |
| 3.1 甘油与葡萄糖、木糖或阿拉伯糖共发酵 | 第122-126页 |
| 3.2 甘油与~(13)C-葡萄糖共发酵 | 第126-128页 |
| 3.3 甘油与混合糖共发酵 | 第128-130页 |
| 3.4 甘油-混合糖共发酵对dhaB1、dhaD及dhaT转录水平影响 | 第130-131页 |
| 3.5 甘油-混合糖共发酵对胞内NADH/NAD~+的影响 | 第131页 |
| 3.6 甘油与木质纤维素水解液的添加比例优化 | 第131-134页 |
| 3.7 分批补料共发酵甘油与玉米秸秆水解液 | 第134-137页 |
| 3.8 分批补料共发酵粗甘油与玉米秸秆水解液 | 第137-138页 |
| 3.9 使用不同底物生产1,3-丙二醇的对比 | 第138页 |
| 4 本章小结 | 第138-140页 |
| 第六章 铜绿假单胞菌乳酸代谢调控蛋白LldR的结构预测、结晶及X-射线衍射分析 | 第140-160页 |
| 1 前言 | 第140-141页 |
| 2 材料与方法 | 第141-147页 |
| 2.1 主要试剂 | 第141-142页 |
| 2.2 主要仪器 | 第142页 |
| 2.3 菌株及培养方法 | 第142-144页 |
| 2.4 LldR蛋白的序列相似性网络分析(SSNP) | 第144页 |
| 2.5 LldR蛋白的结构分析 | 第144页 |
| 2.6 PLldR及PLldR_(fold)基因的克隆 | 第144-145页 |
| 2.7 PLldR及PLldR_(fold)蛋白的表达 | 第145页 |
| 2.8 PLldR蛋白的纯化 | 第145-146页 |
| 2.9 PLldR蛋白结晶条件初筛 | 第146页 |
| 2.10 PLldR蛋白的单晶挑选及X-射线衍射 | 第146-147页 |
| 3 结果与讨论 | 第147-158页 |
| 3.1 LldR同源蛋白的序列相似性网络分析 | 第147页 |
| 3.2 LldR同源蛋白的序列同源性分析及结构预测 | 第147-152页 |
| 3.3 PLldR的表达及纯化 | 第152-156页 |
| 3.4 PLldR的结晶及X-射线衍射分析 | 第156-158页 |
| 4 本章小结 | 第158-160页 |
| 参考文献 | 第160-174页 |
| 结束语 | 第174-176页 |
| 致谢 | 第176-178页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第178-180页 |
| 附表 | 第180页 |
