摘要 | 第4-6页 |
Abstract | 第6-7页 |
第一章 前言 | 第14-34页 |
1.1 SERPINA3K的简介 | 第14-21页 |
1.1.1 SERPINA3K的发现与鉴定 | 第14-15页 |
1.1.2 SERPINA3K的生理活性 | 第15-18页 |
1.1.3 SERPINA3K在疾病研究中的药理活性作用 | 第18-20页 |
1.1.4 SERPINA3K的总结 | 第20-21页 |
1.2 4-HNE在氧化应激中的作用 | 第21-27页 |
1.2.1 4-HNE的产生与降解 | 第21-22页 |
1.2.2 4-HNE的生物学功能 | 第22-23页 |
1.2.3 4-HNE参与氧化应激的机制 | 第23-26页 |
1.2.4 4-HNE的氧化应激作用与疾病研究 | 第26-27页 |
1.2.5 总结 | 第27页 |
1.3 氧化应激在角膜疾病中的研究进展 | 第27-34页 |
1.3.1 氧化应激的简介 | 第27-30页 |
1.3.2 氧化应激在角膜疾病中的研究进展 | 第30-34页 |
第二章 实验材料 | 第34-40页 |
2.1 实验材料与仪器 | 第34-37页 |
2.1.1 细胞系和实验动物 | 第34页 |
2.1.2 实验试剂 | 第34-36页 |
2.1.3 实验仪器 | 第36-37页 |
2.2 主要溶液配制 | 第37-40页 |
2.2.1 细胞培养相关溶液 | 第37-38页 |
2.2.2 细胞裂解液 | 第38页 |
2.2.3 Western Blot实验溶液 | 第38-39页 |
2.2.4 免疫荧光实验溶液 | 第39-40页 |
第三章 实验方法 | 第40-53页 |
3.1 SERPINA3K的纯化 | 第40页 |
3.2 细胞培养 | 第40-42页 |
3.2.1 细胞的复苏 | 第40页 |
3.2.2 细胞的传代 | 第40-41页 |
3.2.3 细胞的冻存 | 第41页 |
3.2.4 细胞的计数与种板 | 第41-42页 |
3.2.5 细胞爬片的制作 | 第42页 |
3.2.6 HCE细胞的4-HNE处理及SERPINA3K给药处理 | 第42页 |
3.3 动物实验 | 第42-43页 |
3.4 CCK-8法测定细胞活性 | 第43页 |
3.5 冰冻切片的制备 | 第43-44页 |
3.5.1 载玻片处理 | 第43-44页 |
3.5.2 冰冻切片制备 | 第44页 |
3.6 H&E染色 | 第44-45页 |
3.7 TUNEL染色 | 第45页 |
3.8 免疫荧光染色 | 第45-46页 |
3.9 免疫印迹实验 | 第46-49页 |
3.9.1 蛋白样品制备 | 第46-47页 |
3.9.2 电泳分离 | 第47-48页 |
3.9.3 蛋白膜转移 | 第48-49页 |
3.9.4 抗体杂交与显色 | 第49页 |
3.9.5 膜再生 | 第49页 |
3.10 实时荧光定量PCR | 第49-52页 |
3.10.1 RNA提取 | 第49-50页 |
3.10.2 逆转录 | 第50-51页 |
3.10.3 PCR | 第51-52页 |
3.11 统计学分析 | 第52-53页 |
第四章 实验结果 | 第53-75页 |
4.1 SERPINA3K抑制4-HNE诱导的人角膜上皮细胞的氧化应激 | 第53-68页 |
4.1.1 SERPINA3K对HCE细胞活性的影响 | 第53-56页 |
4.1.2 SERPINA3K抑制4-HNE诱导的氧化应激标记物3-NT表达增强 | 第56-57页 |
4.1.3 SERPINA3K拮抗4-HNE诱导的氧化应激作用的机制研究 | 第57-68页 |
4.2 SERPINA3K抑制4-HNE诱导的大鼠角膜上皮的氧化应激 | 第68-75页 |
4.2.1 SERPINA3K对大鼠角膜上皮形态的影响 | 第68-69页 |
4.2.2 SERPINA3K对4-HNE引起的大鼠角膜上皮细胞损伤的保护作用 | 第69页 |
4.2.3 SERPINA3K抑制4-HNE诱导的大鼠角膜上皮中的氧化应激产物表达 | 第69-71页 |
4.2.4 SERPINA3K抑制4-HNE诱导的大鼠角膜上皮氧化应激的机制研究 | 第71-75页 |
第五章 讨论 | 第75-79页 |
第六章 总结 | 第79-80页 |
参考文献 | 第80-93页 |
附录 | 第93-97页 |
致谢 | 第97-98页 |