| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-24页 |
| 1.1 生物信息学 | 第12-13页 |
| 1.1.1 生物信息学概述 | 第12页 |
| 1.1.2 生物信息学发展的意义 | 第12页 |
| 1.1.3 生物信息学主要研究内容 | 第12-13页 |
| 1.2 基因组编辑技术简介 | 第13-18页 |
| 1.2.1 ZFNs技术 | 第13-14页 |
| 1.2.2 TALEN技术 | 第14-16页 |
| 1.2.3 CRISPR/Cas系统 | 第16-18页 |
| 1.3 油菜素内酯及其信号转导 | 第18-22页 |
| 1.3.1 油菜素内酯简介 | 第18-19页 |
| 1.3.2 油菜素内酯生物合成和代谢 | 第19页 |
| 1.3.3 油菜素内酯的信号转导 | 第19-22页 |
| 1.4 研究的目的及意义 | 第22-23页 |
| 1.5 技术路线 | 第23-24页 |
| 第二章 普通烟草NtBSK1、NtBSK2和NtBSK3基因的生物信息学分析 | 第24-36页 |
| 2.1 材料与方法 | 第24-25页 |
| 2.1.1 烟草BSKs基因家族同源检索 | 第24-25页 |
| 2.1.2 生物信息学在线软件分析 | 第25页 |
| 2.2 结果与分析 | 第25-34页 |
| 2.2.1 烟草NtBSK1/NtBSK2/NtBSK3同源分析 | 第25页 |
| 2.2.2 烟草NtBSK1/NtBSK2/NtBSK3理化性质分析 | 第25-26页 |
| 2.2.3 烟草NtBSK1/NtBSK2/NtBSK3蛋白亲/疏水性分析 | 第26-28页 |
| 2.2.4 烟草NtBSK1/NtBSK2/NtBSK3的功能结构域分析 | 第28页 |
| 2.2.5 烟草NtBSK1/NtBSK2/NtBSK3二级及三级结构的预测分析 | 第28-29页 |
| 2.2.6 烟草NtBSK1/NtBSK2/NtBSK3磷酸化位点的分析 | 第29-30页 |
| 2.2.7 烟草NtBSK1/NtBSK2/NtBSK3的信号肽及跨膜区分析 | 第30-33页 |
| 2.2.8 烟草NtBSK1/NtBSK2/NtBSK3多序列比对和进化分析 | 第33-34页 |
| 2.3 本章小结 | 第34-36页 |
| 第三章CRISPR/Cas9定点突变烟草基因NtBSK3 | 第36-54页 |
| 3.1 材料 | 第36-38页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第36页 |
| 3.1.2 实验菌株 | 第36页 |
| 3.1.3 实验载体 | 第36-37页 |
| 3.1.4 主要试剂 | 第37页 |
| 3.1.5 植物组织培养基 | 第37-38页 |
| 3.1.6 大肠杆菌培养基 | 第38页 |
| 3.1.7 农杆菌培养基 | 第38页 |
| 3.1.8 实验试剂溶液 | 第38页 |
| 3.2 方法 | 第38-44页 |
| 3.2.1 靶位点的筛选 | 第38页 |
| 3.2.2 靶位点组装到sgRNA载体上 | 第38-41页 |
| 3.2.3 重组sgRNA目的片段插入pCACas9载体 | 第41-42页 |
| 3.2.4 重组表达载体转化农杆菌感受态 | 第42页 |
| 3.2.5 农杆菌的培养及侵染烟草 | 第42页 |
| 3.2.6 获得基因编辑植株 | 第42-43页 |
| 3.2.7 CTAB法提取烟草DNA | 第43页 |
| 3.2.8 突变体的筛选 | 第43页 |
| 3.2.9 基因突变类型的确定 | 第43-44页 |
| 3.2.10 突变基因NtBSK3的生物信息学分析 | 第44页 |
| 3.3 结果与分析 | 第44-53页 |
| 3.3.1 靶位点的确定 | 第44-46页 |
| 3.3.2 靶位点片段组装到sgRNA上 | 第46页 |
| 3.3.3 sgRNA组装到Cas9载体上 | 第46-47页 |
| 3.3.4 CRISPR/Cas9敲除烟草NtBSK3基因的T0代转基因植株表型及突变体分析 | 第47-49页 |
| 3.3.5 不同位点突变的NtBSK3基因生物信息学分析 | 第49-52页 |
| 3.3.6 脱靶效应检测 | 第52-53页 |
| 3.4 本章小结 | 第53-54页 |
| 第四章 外源喷施BR条件下烟草基因NtBSK1/NtBSK2/NtBSK3的定量表达分析 | 第54-64页 |
| 4.1 材料 | 第54页 |
| 4.2 方法 | 第54-57页 |
| 4.2.1 材料处理 | 第54页 |
| 4.2.2 总RNA的提取 | 第54-55页 |
| 4.2.3 烟草总RNA逆转录成cDNA | 第55-56页 |
| 4.2.4 实时定量PCR引物设计 | 第56-57页 |
| 4.2.5 定量PCR扩增 | 第57页 |
| 4.3 结果分析 | 第57-61页 |
| 4.3.1 提取烟草总RNA的检测 | 第57-58页 |
| 4.3.2 不同处理下基因NtBSK1/NtBSK2/NtBSK3的表达量分析 | 第58-60页 |
| 4.3.3 编辑基因NtBSK3不同处理的表达量量分析 | 第60-61页 |
| 4.4 本章小结 | 第61-64页 |
| 第五章 讨论与结论 | 第64-68页 |
| 5.1 讨论 | 第64-65页 |
| 5.2 创新点 | 第65页 |
| 5.3 结论 | 第65-68页 |
| 参考文献 | 第68-80页 |
| 附录 | 第80-94页 |
| 致谢 | 第94页 |
