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甘蔗原生质体的融合及杂核细胞再生条件的优化

摘要第4-6页
Abstract第6-8页
1 前言第13-23页
    1.1 甘蔗育种现状第13-14页
    1.2 植物原生质体冻存与复苏第14-15页
    1.3 植物细胞融合的方法第15-17页
    1.4 植物体细胞融合体系的类型第17-18页
    1.5 植物体细胞融合后杂种细胞的筛选第18-19页
    1.6 植物原生质体培养第19-21页
        1.6.1 植物原生质体培养概况第19-20页
        1.6.2 植物原生质体培养方法第20-21页
    1.7 甘蔗体细胞融合及植株再生研究进展第21-22页
    1.9 本研究的目的和意义第22-23页
    1.10 技术路线第23页
2 材料与方法第23-30页
    2.1 研究材料第23页
    2.2 酶解方法第23-24页
        2.2.1 甘蔗幼叶酶解方法第23-24页
        2.2.2 甘蔗茎尖酶解方法第24页
    2.3 冻存和复苏方法第24-25页
        2.3.1 不同冻存液组合设计和冻存方法第24-25页
        2.3.2 原生质体复苏方法第25页
    2.4 甘蔗原生质体钝化方法第25-26页
        2.4.1 碘乙酰胺(IOA)钝化处理第25页
        2.4.2 碘乙酰胺失活浓度的确定第25页
        2.4.3 罗丹明(R-6G)钝化处理第25-26页
        2.4.4 罗丹明(R-6G)失活浓度的确定第26页
    2.5 原生质体融合方法第26-27页
        2.5.1 融合液的配置第26页
        2.5.2 PEG高Ca高pH法诱导融合第26-27页
        2.5.3 电融合法诱导融合第27页
    2.6 融合后杂合体细胞的培养第27-28页
        2.6.1 融合后杂核原生质体培养第27-28页
        2.6.2 甘蔗杂合体诱导培养方案的设计第28页
    2.7 细胞活力检测方法第28-29页
        2.7.1 荧光素双醋酸酯(FDA)法第28-29页
        2.7.2 台盼蓝检测法第29页
    2.8 甘蔗原生质体细胞壁检测第29页
    2.9 微管的免疫荧光标记第29-30页
    2.10 DAPI染细胞核方法第30页
    2.11 原生质体再生细胞的分裂频率第30页
    2.12 原生质体再生细胞的植板率第30页
    2.13 数据分析第30页
3 结果与分析第30-67页
    3.1 不同冻存条件对甘蔗原生质体活力和再生能力的影响第30-40页
        3.1.1 不同处理对甘蔗原生质体活力的影响第30-34页
            3.1.1.1 不同冻存液组合对甘蔗原生质体活力的影响第30-32页
            3.1.1.2 不同取材部位对甘蔗原生质体活力的影响第32-33页
            3.1.1.3 不同冻存温度对甘蔗原生质体活力的影响第33-34页
        3.1.2 不同处理对甘蔗原生质体细胞壁再生的影响第34-36页
        3.1.3 不同处理对甘蔗原生质体细胞分裂的影响第36-39页
        3.1.4 冻存对甘蔗原生质体微管形成的影响第39-40页
    3.2 钝化剂对甘蔗原生质体活力和植板率的影响第40-46页
        3.2.1 不同IOA浓度对甘蔗原生质体活力的影响第40-41页
        3.2.2 不同IOA浓度对甘蔗原生质体植板率的影响第41-43页
        3.2.3 不同R-6G浓度对甘蔗原生质体活力的影响第43-46页
    3.3 PEG融合体系的优化第46-50页
        3.3.1 原生质体融合过程第46-47页
        3.3.2 不同PEG浓度对甘蔗原生质体融合率的影响第47页
        3.3.3 不同融合时间对甘蔗原生质体融合率的影响第47-48页
        3.3.4 不同Ca~(2+)浓度对甘蔗原生质体融合率的影响第48-49页
        3.3.5 不同PEG用量对甘蔗原生质体融合的影响第49-50页
    3.4 电融合体系的优化第50-58页
        3.4.1 电融合过程第50-51页
        3.4.2 不同甘蔗原生质体密度对甘蔗原生质体融合率的影响第51-52页
        3.4.3 不同交流电场强度对甘蔗原生质体融合率的影响第52-53页
        3.4.4 不同脉冲强度对甘蔗原生质体融合率的影响第53-54页
        3.4.5 不同脉冲宽度对甘蔗原生质体融合率的影响第54-55页
        3.4.6 不同脉冲个数对甘蔗原生质体融合率及破损率的影响第55-56页
        3.4.7 不同融合方法对原生质体融合后微管形成的影响第56-58页
    3.5 杂合体细胞培养体系的优化第58-67页
        3.5.1 甘蔗杂合体诱导培养组合的极差分析第58-60页
        3.5.2 甘蔗杂合体诱导培养组合的方差分析第60-61页
        3.5.3 不同培养组合对甘蔗杂合体培养过程中细胞形态的变化影响差异第61-63页
        3.5.4 不同培养组合对甘蔗杂合体培养过程中细胞壁的再生的影响差异第63-65页
        3.5.5 不同培养条件对甘蔗杂合体细胞分裂的影响第65-66页
        3.5.6 不同培养组合对杂合体愈伤组织形成的影响第66-67页
4 讨论第67-75页
    4.1 不同冻存条件对原生质体活力和再生能力的影响第67-69页
        4.1.1 不同冻存液组合对甘蔗原生质体活力和再生能力的影响第67-68页
        4.1.2 不同取材部位对甘蔗原生质体活力和再生能力的影响第68页
        4.1.3 不同冻存温度对对甘蔗原生质体活力和再生能力的影响第68-69页
        4.1.4 冻存后微管的变化第69页
    4.2 不同浓度的钝化剂对原生质体活力和再生能力的影响第69-70页
    4.3 PEG融合条件的优化第70-71页
        4.3.1 不同PEG浓度和PEG用量对甘蔗原生质体融合率的影响第70-71页
        4.3.2 不同Ca~(2+)浓度对甘蔗原生质体融合率的影响第71页
    4.4 不同电融合条件的对原生质体融合的影响第71-73页
        4.4.5 不同融合方法对微管骨架影响第72-73页
    4.5 杂核体细胞培养条件的优化第73-75页
        4.5.1 杂核细胞培养密度的优化第73-74页
        4.5.2 培养条件对杂核细胞再生的影响第74页
        4.5.3 激素浓度对杂核细胞再生的影响第74-75页
5 结论第75-77页
    5.1 全文总结第75页
    5.2 问题与展望第75-76页
    5.3 创新点第76-77页
文献第77-83页
附表第83-85页
致谢第85-86页
攻读学位期间科研及论文发表情况第86页

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