| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 1 前言 | 第13-23页 |
| 1.1 甘蔗育种现状 | 第13-14页 |
| 1.2 植物原生质体冻存与复苏 | 第14-15页 |
| 1.3 植物细胞融合的方法 | 第15-17页 |
| 1.4 植物体细胞融合体系的类型 | 第17-18页 |
| 1.5 植物体细胞融合后杂种细胞的筛选 | 第18-19页 |
| 1.6 植物原生质体培养 | 第19-21页 |
| 1.6.1 植物原生质体培养概况 | 第19-20页 |
| 1.6.2 植物原生质体培养方法 | 第20-21页 |
| 1.7 甘蔗体细胞融合及植株再生研究进展 | 第21-22页 |
| 1.9 本研究的目的和意义 | 第22-23页 |
| 1.10 技术路线 | 第23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-30页 |
| 2.1 研究材料 | 第23页 |
| 2.2 酶解方法 | 第23-24页 |
| 2.2.1 甘蔗幼叶酶解方法 | 第23-24页 |
| 2.2.2 甘蔗茎尖酶解方法 | 第24页 |
| 2.3 冻存和复苏方法 | 第24-25页 |
| 2.3.1 不同冻存液组合设计和冻存方法 | 第24-25页 |
| 2.3.2 原生质体复苏方法 | 第25页 |
| 2.4 甘蔗原生质体钝化方法 | 第25-26页 |
| 2.4.1 碘乙酰胺(IOA)钝化处理 | 第25页 |
| 2.4.2 碘乙酰胺失活浓度的确定 | 第25页 |
| 2.4.3 罗丹明(R-6G)钝化处理 | 第25-26页 |
| 2.4.4 罗丹明（R-6G)失活浓度的确定 | 第26页 |
| 2.5 原生质体融合方法 | 第26-27页 |
| 2.5.1 融合液的配置 | 第26页 |
| 2.5.2 PEG高Ca高pH法诱导融合 | 第26-27页 |
| 2.5.3 电融合法诱导融合 | 第27页 |
| 2.6 融合后杂合体细胞的培养 | 第27-28页 |
| 2.6.1 融合后杂核原生质体培养 | 第27-28页 |
| 2.6.2 甘蔗杂合体诱导培养方案的设计 | 第28页 |
| 2.7 细胞活力检测方法 | 第28-29页 |
| 2.7.1 荧光素双醋酸酯(FDA)法 | 第28-29页 |
| 2.7.2 台盼蓝检测法 | 第29页 |
| 2.8 甘蔗原生质体细胞壁检测 | 第29页 |
| 2.9 微管的免疫荧光标记 | 第29-30页 |
| 2.10 DAPI染细胞核方法 | 第30页 |
| 2.11 原生质体再生细胞的分裂频率 | 第30页 |
| 2.12 原生质体再生细胞的植板率 | 第30页 |
| 2.13 数据分析 | 第30页 |
| 3 结果与分析 | 第30-67页 |
| 3.1 不同冻存条件对甘蔗原生质体活力和再生能力的影响 | 第30-40页 |
| 3.1.1 不同处理对甘蔗原生质体活力的影响 | 第30-34页 |
| 3.1.1.1 不同冻存液组合对甘蔗原生质体活力的影响 | 第30-32页 |
| 3.1.1.2 不同取材部位对甘蔗原生质体活力的影响 | 第32-33页 |
| 3.1.1.3 不同冻存温度对甘蔗原生质体活力的影响 | 第33-34页 |
| 3.1.2 不同处理对甘蔗原生质体细胞壁再生的影响 | 第34-36页 |
| 3.1.3 不同处理对甘蔗原生质体细胞分裂的影响 | 第36-39页 |
| 3.1.4 冻存对甘蔗原生质体微管形成的影响 | 第39-40页 |
| 3.2 钝化剂对甘蔗原生质体活力和植板率的影响 | 第40-46页 |
| 3.2.1 不同IOA浓度对甘蔗原生质体活力的影响 | 第40-41页 |
| 3.2.2 不同IOA浓度对甘蔗原生质体植板率的影响 | 第41-43页 |
| 3.2.3 不同R-6G浓度对甘蔗原生质体活力的影响 | 第43-46页 |
| 3.3 PEG融合体系的优化 | 第46-50页 |
| 3.3.1 原生质体融合过程 | 第46-47页 |
| 3.3.2 不同PEG浓度对甘蔗原生质体融合率的影响 | 第47页 |
| 3.3.3 不同融合时间对甘蔗原生质体融合率的影响 | 第47-48页 |
| 3.3.4 不同Ca~(2+)浓度对甘蔗原生质体融合率的影响 | 第48-49页 |
| 3.3.5 不同PEG用量对甘蔗原生质体融合的影响 | 第49-50页 |
| 3.4 电融合体系的优化 | 第50-58页 |
| 3.4.1 电融合过程 | 第50-51页 |
| 3.4.2 不同甘蔗原生质体密度对甘蔗原生质体融合率的影响 | 第51-52页 |
| 3.4.3 不同交流电场强度对甘蔗原生质体融合率的影响 | 第52-53页 |
| 3.4.4 不同脉冲强度对甘蔗原生质体融合率的影响 | 第53-54页 |
| 3.4.5 不同脉冲宽度对甘蔗原生质体融合率的影响 | 第54-55页 |
| 3.4.6 不同脉冲个数对甘蔗原生质体融合率及破损率的影响 | 第55-56页 |
| 3.4.7 不同融合方法对原生质体融合后微管形成的影响 | 第56-58页 |
| 3.5 杂合体细胞培养体系的优化 | 第58-67页 |
| 3.5.1 甘蔗杂合体诱导培养组合的极差分析 | 第58-60页 |
| 3.5.2 甘蔗杂合体诱导培养组合的方差分析 | 第60-61页 |
| 3.5.3 不同培养组合对甘蔗杂合体培养过程中细胞形态的变化影响差异 | 第61-63页 |
| 3.5.4 不同培养组合对甘蔗杂合体培养过程中细胞壁的再生的影响差异 | 第63-65页 |
| 3.5.5 不同培养条件对甘蔗杂合体细胞分裂的影响 | 第65-66页 |
| 3.5.6 不同培养组合对杂合体愈伤组织形成的影响 | 第66-67页 |
| 4 讨论 | 第67-75页 |
| 4.1 不同冻存条件对原生质体活力和再生能力的影响 | 第67-69页 |
| 4.1.1 不同冻存液组合对甘蔗原生质体活力和再生能力的影响 | 第67-68页 |
| 4.1.2 不同取材部位对甘蔗原生质体活力和再生能力的影响 | 第68页 |
| 4.1.3 不同冻存温度对对甘蔗原生质体活力和再生能力的影响 | 第68-69页 |
| 4.1.4 冻存后微管的变化 | 第69页 |
| 4.2 不同浓度的钝化剂对原生质体活力和再生能力的影响 | 第69-70页 |
| 4.3 PEG融合条件的优化 | 第70-71页 |
| 4.3.1 不同PEG浓度和PEG用量对甘蔗原生质体融合率的影响 | 第70-71页 |
| 4.3.2 不同Ca~(2+)浓度对甘蔗原生质体融合率的影响 | 第71页 |
| 4.4 不同电融合条件的对原生质体融合的影响 | 第71-73页 |
| 4.4.5 不同融合方法对微管骨架影响 | 第72-73页 |
| 4.5 杂核体细胞培养条件的优化 | 第73-75页 |
| 4.5.1 杂核细胞培养密度的优化 | 第73-74页 |
| 4.5.2 培养条件对杂核细胞再生的影响 | 第74页 |
| 4.5.3 激素浓度对杂核细胞再生的影响 | 第74-75页 |
| 5 结论 | 第75-77页 |
| 5.1 全文总结 | 第75页 |
| 5.2 问题与展望 | 第75-76页 |
| 5.3 创新点 | 第76-77页 |
| 文献 | 第77-83页 |
| 附表 | 第83-85页 |
| 致谢 | 第85-86页 |
| 攻读学位期间科研及论文发表情况 | 第86页 |
