| 摘要 | 第2-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 缩略语 | 第9-11页 |
| 前言 | 第11-21页 |
| 1 生防微生物概况 | 第11-13页 |
| 1.1 生防微生物的研究方向 | 第11页 |
| 1.2 生防微生物的主要类群 | 第11-13页 |
| 1.2.1 生防真菌 | 第11-12页 |
| 1.2.2 生防细菌 | 第12-13页 |
| 1.2.3 生防放线菌 | 第13页 |
| 1.3 生防微生物研究中存在的问题 | 第13页 |
| 2 地衣芽孢杆菌的应用和作用机制 | 第13-17页 |
| 2.1 地衣芽孢杆菌的应用和防效 | 第14-15页 |
| 2.1.1 用于田间植物病害的防治应用 | 第14页 |
| 2.1.2 用于采后果蔬病害的防治应用 | 第14-15页 |
| 2.1.3 在其他领域的应用 | 第15页 |
| 2.2 地衣芽孢杆菌的作用机制 | 第15-17页 |
| 2.2.1 营养和空间竞争 | 第15-16页 |
| 2.2.2 抑菌抗生作用 | 第16页 |
| 2.2.3 溶菌作用 | 第16页 |
| 2.2.4 诱导抗性 | 第16-17页 |
| 2.2.5 促生作用 | 第17页 |
| 3 植物病原细菌harpin蛋白 | 第17-20页 |
| 3.1 植物病原细菌hrp基因 | 第17-18页 |
| 3.2 水稻黄单胞harpin蛋白及抗病机制 | 第18-20页 |
| 3.2.1 Harpin蛋白 | 第18-20页 |
| 3.2.2 水稻黄单胞harpin_(Xoo)蛋白及抗病机制 | 第20页 |
| 4 本研究的目的和意义 | 第20-21页 |
| 材料与方法 | 第21-41页 |
| 1 材料 | 第21-25页 |
| 1.1 供试烟草 | 第21页 |
| 1.2 供试菌株、质粒 | 第21页 |
| 1.3 主要试材和仪器 | 第21-23页 |
| 1.4 培养基 | 第23-24页 |
| 1.5 常用溶液及缓冲液 | 第24-25页 |
| 1.5.1 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)相关溶液 | 第24页 |
| 1.5.2 低压蛋白纯化系统相关溶液 | 第24页 |
| 1.5.3 蛋白提取中的缓冲液 | 第24页 |
| 1.5.4 凝胶电泳缓冲液 | 第24-25页 |
| 2 烟草种植 | 第25页 |
| 3 W10抗菌蛋白样品制备和活性检测 | 第25-26页 |
| 3.1 蛋白样品制备 | 第25页 |
| 3.2 蛋白样品冻干浓缩及SDS-PAGE检测 | 第25-26页 |
| 3.3 蛋白样品抗菌活性检测 | 第26页 |
| 4 蛋白样品的纯化及活性检测 | 第26页 |
| 5 蛋白样品质谱鉴定 | 第26-27页 |
| 5.1 胶内酶解 | 第26-27页 |
| 5.2 质谱分析 | 第27页 |
| 6 W10抗菌蛋白的丝氨酸蛋白酶活性分析 | 第27-28页 |
| 7 W10抗菌蛋白基因的克隆 | 第28-30页 |
| 7.1 gDNA的提取及纯化 | 第28-29页 |
| 7.2 琼脂糖凝胶电泳分析 | 第29页 |
| 7.3 引物设计及PCR扩增 | 第29页 |
| 7.4 抗菌蛋白编码基因和氨基酸序列分析 | 第29-30页 |
| 8 W10抗菌蛋白的生物信息学分析 | 第30页 |
| 9 W10抗菌蛋白的表达分析 | 第30-36页 |
| 9.1 大肠杆菌系统重组蛋白表达 | 第30-35页 |
| 9.1.1 表达载体的构建 | 第30页 |
| 9.1.2 引物设计及PCR扩增 | 第30-31页 |
| 9.1.3 琼脂糖凝胶DNA纯化 | 第31页 |
| 9.1.4 质粒的提取 | 第31-32页 |
| 9.1.5 双酶切及纯化 | 第32-33页 |
| 9.1.6 目的片段的连接 | 第33页 |
| 9.1.7 大肠杆菌DH5α感受态的制备 | 第33页 |
| 9.1.8 连接产物的转化 | 第33-34页 |
| 9.1.9 菌落PCR验证 | 第34页 |
| 9.1.10 重组质粒转化大肠杆菌BL21 | 第34页 |
| 9.1.11 重组融合蛋白的诱导表达 | 第34页 |
| 9.1.12 Western Blot验证 | 第34-35页 |
| 9.2 枯草芽孢杆菌系统重组蛋白表达 | 第35-36页 |
| 9.2.1 表达载体的构建 | 第35页 |
| 9.2.2 连接产物的转化 | 第35-36页 |
| 9.2.3 菌落PCR验证 | 第36页 |
| 9.2.4 重组蛋白表达 | 第36页 |
| 9.2.5 Western Blot验证 | 第36页 |
| 9.3 重组蛋白活性检测 | 第36页 |
| 10 W10抗菌蛋白与harpin蛋白协同作用的研究 | 第36-41页 |
| 10.1 不同诱导时间的抗病性 | 第36页 |
| 10.2 协同的诱导抗病性 | 第36-37页 |
| 10.3 协同作用的相关抗病防卫反应基因的表达 | 第37-41页 |
| 10.3.1 提取烟草总RNA | 第37-38页 |
| 10.3.2 RNA反转录成cDNA | 第38页 |
| 10.3.3 检测抗病防卫反应相关基因表达 | 第38-41页 |
| 结果与分析 | 第41-57页 |
| 1 W10抗菌蛋白的提取及鉴定 | 第41-45页 |
| 1.1 粗蛋白的提取及活性检测 | 第41页 |
| 1.2 粗蛋白的纯化及活性检测 | 第41-42页 |
| 1.3 纯化蛋白的质谱分析和鉴定 | 第42-43页 |
| 1.4 抗菌蛋白编码基因克隆与氨基酸序列分析 | 第43-45页 |
| 2 抗菌蛋白生物学信息分析 | 第45-49页 |
| 2.1 抗菌蛋白氨基酸组成、分子量和等电点分析 | 第45-46页 |
| 2.2 疏水性、信号肽预测和跨膜区分析 | 第46-47页 |
| 2.3 结构域预测及蛋白质二级、三级结构分析 | 第47-49页 |
| 3 PMSF对蛋白的抑制作用 | 第49-50页 |
| 4 大肠杆菌系统重组蛋白表达 | 第50-52页 |
| 4.1 目的基因双酶切、连接及转化 | 第50-51页 |
| 4.2 重组克隆BL21/pET-28a(+)::w10的蛋白表达验证 | 第51-52页 |
| 4.3 Western Blot验证 | 第52页 |
| 5 枯草芽孢杆菌系统重组蛋白表达 | 第52-54页 |
| 5.1 表达载体的构建 | 第52-53页 |
| 5.2 重组蛋白表达PAGE电泳验证 | 第53页 |
| 5.3 Western Blot验证 | 第53页 |
| 5.4 重组蛋白活性检测 | 第53-54页 |
| 6 W10抗菌蛋白与harpin蛋白的协同作用 | 第54-57页 |
| 6.1 不同诱导时间的抗病性 | 第54页 |
| 6.2 两种蛋白协同的诱导抗性 | 第54-55页 |
| 6.3 抗病防卫反应相关基因的表达 | 第55-57页 |
| 讨论 | 第57-61页 |
| 1 地衣芽孢杆菌W10抗菌蛋白及丝氨酸蛋白酶 | 第57页 |
| 2 W10抗菌蛋白的表达分析 | 第57-59页 |
| 2.1 大肠杆菌系统重组蛋白表达 | 第57-59页 |
| 2.2 枯草芽孢杆菌系统重组蛋白表达 | 第59页 |
| 3 W10抗菌蛋白与harpin蛋白的协同作用 | 第59-61页 |
| 参考文献 | 第61-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第73-74页 |
