| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第14-26页 |
| 1.1 海洋生物资源 | 第14-15页 |
| 1.1.1 海洋环境特点 | 第14页 |
| 1.1.2 海洋资源研究现状 | 第14-15页 |
| 1.2 海洋酶制剂的来源 | 第15-19页 |
| 1.2.1 海洋微生物 | 第15-18页 |
| 1.2.1.1 海洋沉积物及海水中的微生物 | 第15-17页 |
| 1.2.1.2 极端微生物 | 第17-18页 |
| 1.2.1.3 海洋共生微生物 | 第18页 |
| 1.2.2 海洋动物 | 第18-19页 |
| 1.2.3 海洋植物 | 第19页 |
| 1.3 海洋蛋白酶研究现状 | 第19-20页 |
| 1.4 微小杆菌属蛋白酶 | 第20-21页 |
| 1.5 蛋白酶在食品加工中的应用 | 第21-24页 |
| 1.5.1 改变食物蛋白质的功能特性 | 第21-22页 |
| 1.5.2 降低食物蛋白质的致敏性 | 第22页 |
| 1.5.3 改善食品的呈味 | 第22-23页 |
| 1.5.4 制备功能性肽 | 第23-24页 |
| 1.5.5 应用于清洁工序 | 第24页 |
| 1.6 本课题研究的立题依据和主要研究内容 | 第24-26页 |
| 1.6.1 立题依据 | 第24-25页 |
| 1.6.2 主要研究内容 | 第25-26页 |
| 第二章 产蛋白酶深海细菌的筛选鉴定 | 第26-34页 |
| 2.1 实验材料 | 第26-28页 |
| 2.1.1 样品 | 第26页 |
| 2.1.2 试剂与培养基 | 第26-27页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第27-28页 |
| 2.2 实验方法 | 第28-30页 |
| 2.2.1 蛋白酶活力测定方法 | 第28页 |
| 2.2.2 产蛋白酶深海细菌的富集与初筛 | 第28-29页 |
| 2.2.3 产蛋白酶深海细菌的复筛 | 第29页 |
| 2.2.4 产蛋白酶深海细菌的鉴定 | 第29页 |
| 2.2.5 遗传稳定性 | 第29-30页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第30-33页 |
| 2.3.1 初筛结果 | 第30页 |
| 2.3.2 复筛结果 | 第30-31页 |
| 2.3.3 菌种鉴定 | 第31-33页 |
| 2.3.4 菌种的遗传稳定性 | 第33页 |
| 2.4 本章小结 | 第33-34页 |
| 第三章 Exiguobacterium sp. SWJS2 发酵产蛋白酶条件优化 | 第34-44页 |
| 3.1 实验材料 | 第34-35页 |
| 3.1.1 实验菌株 | 第34页 |
| 3.1.2 试剂与培养基 | 第34-35页 |
| 3.1.3 仪器 | 第35页 |
| 3.2 实验方法 | 第35-36页 |
| 3.2.1 单因素试验 | 第35-36页 |
| 3.2.1.1 发酵温度对SWJS2 产蛋白酶的影响 | 第35页 |
| 3.2.1.2 初始pH对SWJS2 产蛋白酶的影响 | 第35页 |
| 3.2.1.3 装液量对SWJS2 产蛋白酶的影响 | 第35-36页 |
| 3.2.1.4 接种量对SWJS2 产蛋白酶的影响 | 第36页 |
| 3.2.1.5 摇床转速对SWJS2 产蛋白酶的影响 | 第36页 |
| 3.2.1.6 种龄及发酵时间对SWJS2 产蛋白酶的影响 | 第36页 |
| 3.2.1.7 碳源对SWJS2 产蛋白酶的影响 | 第36页 |
| 3.2.1.8 氮源对SWJS2 产蛋白酶的影响 | 第36页 |
| 3.2.1.9 甘油对SWJS2 产蛋白酶的影响 | 第36页 |
| 3.2.1.10 无机盐浓度对SWJS2 产蛋白酶的影响 | 第36页 |
| 3.2.2 正交试验 | 第36页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第36-43页 |
| 3.3.1 单因素试验结果 | 第36-42页 |
| 3.3.1.1 发酵温度对SWJS2 产蛋白酶的影响 | 第36-37页 |
| 3.3.1.2 初始pH对SWJS2 产蛋白酶的影响 | 第37页 |
| 3.3.1.3 装液量对SWJS2 产蛋白酶的影响 | 第37-38页 |
| 3.3.1.4 接种量对SWJS2 产蛋白酶的影响 | 第38页 |
| 3.3.1.5 摇床转速对SWJS2 产蛋白酶的影响 | 第38-39页 |
| 3.3.1.6 种龄及发酵时间对SWJS2 产蛋白酶的影响 | 第39-40页 |
| 3.3.1.7 碳源对SWJS2 产蛋白酶的影响 | 第40页 |
| 3.3.1.8 氮源对SWJS2 产蛋白酶的影响 | 第40-41页 |
| 3.3.1.9 甘油对SWJS2 产蛋白酶的影响 | 第41页 |
| 3.3.1.10 无机盐浓度对SWJS2 产蛋白酶的影响 | 第41-42页 |
| 3.3.2 正交试验结果 | 第42-43页 |
| 3.4 本章小结 | 第43-44页 |
| 第四章 Exiguobacterium sp. SWJS2 蛋白酶分离纯化与酶学性质 | 第44-53页 |
| 4.1 实验材料 | 第44-45页 |
| 4.1.1 材料 | 第44页 |
| 4.1.2 试剂 | 第44页 |
| 4.1.3 仪器 | 第44-45页 |
| 4.2 实验方法 | 第45-46页 |
| 4.2.1 蛋白含量测定 | 第45页 |
| 4.2.2 粗蛋白酶的制备 | 第45页 |
| 4.2.3 DEAE-Sepharose FF 阴离子交换层析 | 第45页 |
| 4.2.4 Sephdex G-75 凝胶过滤层析 | 第45页 |
| 4.2.5 十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第45-46页 |
| 4.2.6 温度对蛋白酶的影响 | 第46页 |
| 4.2.7 pH对蛋白酶的影响 | 第46页 |
| 4.2.8 NaCl对蛋白酶活力的影响 | 第46页 |
| 4.2.9 金属离子对蛋白酶活性的影响 | 第46页 |
| 4.2.10 不同蛋白酶抑制剂对蛋白酶活性的影响 | 第46页 |
| 4.2.11 蛋白酶动力学研究 | 第46页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第46-52页 |
| 4.3.1 蛋白酶分离纯化结果 | 第46-48页 |
| 4.3.2 蛋白酶纯度鉴定及分子量 | 第48页 |
| 4.3.3 温度对蛋白酶的影响 | 第48-49页 |
| 4.3.4 pH对蛋白酶的影响 | 第49-50页 |
| 4.3.5 NaCl对蛋白酶活力的影响 | 第50页 |
| 4.3.6 金属离子对蛋白酶活性的影响 | 第50-51页 |
| 4.3.7 不同蛋白酶抑制剂对蛋白酶活性的影响 | 第51页 |
| 4.3.8 蛋白酶动力学 | 第51-52页 |
| 4.4 本章小结 | 第52-53页 |
| 第五章 Exiguobacterium sp. SWJS2 蛋白酶酶解特异性的研究 | 第53-62页 |
| 5.1 实验材料 | 第53-54页 |
| 5.1.1 原料与酶制剂 | 第53页 |
| 5.1.2 试剂 | 第53-54页 |
| 5.1.3 仪器 | 第54页 |
| 5.2 实验方法 | 第54-55页 |
| 5.2.1 酶解工艺与条件 | 第54页 |
| 5.2.2 游离及水解氨基酸的测定 | 第54-55页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第55-60页 |
| 5.3.1 凤尾鱼蛋白与大豆蛋白酶解产物中游离氨基酸的组成 | 第55-56页 |
| 5.3.2 不同蛋白酶作用下各种氨基酸最高释放比例及所需时间 | 第56-58页 |
| 5.3.3 酶解过程中各种游离氨基酸变化规律 | 第58-59页 |
| 5.3.4 微小杆菌属酶解特异性的分析 | 第59-60页 |
| 5.4 本章小结 | 第60-62页 |
| 结论与展望 | 第62-64页 |
| 一、结论 | 第62页 |
| 二、主要创新点 | 第62-63页 |
| 三、展望 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-75页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第75-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 附件 | 第77页 |
