| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 插图和附表清单 | 第8-9页 |
| 1 引言 | 第9-15页 |
| 1.1 乳糖酶概述 | 第9页 |
| 1.2 乳糖酶来源及生产现状 | 第9-12页 |
| 1.2.1 微生物发酵产乳糖酶的优势 | 第9-10页 |
| 1.2.2 高产乳糖酶菌株的选育 | 第10-11页 |
| 1.2.3 分子生物学用于高产乳糖酶菌株改良 | 第11-12页 |
| 1.3 从传统食品分离筛选微生物的优势 | 第12-13页 |
| 1.4 乳糖酶分离提取技术 | 第13-14页 |
| 1.4.1 菌种破壁技术 | 第13页 |
| 1.4.2 酶的粗分离技术 | 第13-14页 |
| 1.4.3 酶的柱层析法概述 | 第14页 |
| 1.5 本论文研究目的及意义 | 第14-15页 |
| 2 试验材料与方法 | 第15-21页 |
| 2.1 试验材料 | 第15-17页 |
| 2.1.1 试验菌株 | 第15页 |
| 2.1.2 培养基 | 第15页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第15页 |
| 2.1.4 主要试剂 | 第15-16页 |
| 2.1.5 反应用溶液的配制 | 第16-17页 |
| 2.2 试验方法 | 第17-19页 |
| 2.2.1 种子液的制备 | 第17页 |
| 2.2.2 高产乳糖酶菌株初筛试验 | 第17页 |
| 2.2.3 高产乳糖酶菌株的复筛 | 第17页 |
| 2.2.4 高产乳醣酶菌株酶表达方式的确定 | 第17-18页 |
| 2.2.5 MI培养基的优化 | 第18页 |
| 2.2.6 粗酶液的制备 | 第18页 |
| 2.2.7 高产乳糖酶菌株生长曲线及产酶曲线的测定 | 第18页 |
| 2.2.8 酶的分离纯化 | 第18-19页 |
| 2.2.8.1 粗酶液的制备 | 第18页 |
| 2.2.8.2 硫酸铵分级沉淀 | 第18-19页 |
| 2.2.8.3 Sephadex G-100分子筛层析 | 第19页 |
| 2.3 指标测定方法 | 第19-21页 |
| 2.3.1 酶活力的测定 | 第19-20页 |
| 2.3.1.1 邻硝基苯酚浓度标准曲线的绘制 | 第19页 |
| 2.3.1.2 样品酶活力测定 | 第19-20页 |
| 2.3.1.3 酶活力计算公式 | 第20页 |
| 2.3.2 菌体干重的测定 | 第20页 |
| 2.3.3 OD值的测定 | 第20页 |
| 2.3.4 蛋白质含量的测定 | 第20-21页 |
| 3 结果与分析 | 第21-35页 |
| 3.1 高产乳糖酶菌株初筛结果 | 第21-22页 |
| 3.2 产乳糖酶菌株复筛结果 | 第22页 |
| 3.3 高产乳醣酶菌株酶表达方式确定 | 第22-23页 |
| 3.4 高产乳糖酶菌株培养基优化结果 | 第23-31页 |
| 3.4.1 培养基碳源筛选 | 第23-25页 |
| 3.4.1.1 碳源种类对产酶与生长的影响 | 第23-24页 |
| 3.4.1.2 碳源含量对产酶与生长的影响 | 第24-25页 |
| 3.4.2 培养基氮源筛选 | 第25-28页 |
| 3.4.2.1 氮源种类对产酶与生长的影响 | 第25-27页 |
| 3.4.2.2 氮源水平对产酶及生长的影响 | 第27-28页 |
| 3.4.3 培养基中金属离子的筛选 | 第28-30页 |
| 3.4.3.1 金属离子对产酶及生长的影响 | 第28-29页 |
| 3.4.3.2 金属离子含量对产酶及生长的影响 | 第29-30页 |
| 3.4.4 酵母菌基础培养基优化正交试验结果 | 第30-31页 |
| 3.5 酵母菌J2产酶曲线及生长曲线测定结果 | 第31-32页 |
| 3.6 酶的分离提取结果与分析 | 第32-35页 |
| 3.6.1 饱和硫酸铵分级盐析结果 | 第33页 |
| 3.6.2 Sephadex G-100凝胶柱层析 | 第33-35页 |
| 4 讨论 | 第35-36页 |
| 4.1 高产乳醣酶菌株筛选方法 | 第35页 |
| 4.2 产胞外乳糖酶菌株在提取分离中具有优势 | 第35页 |
| 4.3 培养基成分对菌株产乳糖酶的影响 | 第35-36页 |
| 4.4 产酶及生长曲线测定意义 | 第36页 |
| 4.5 硫酸铵盐析和SephadexG-100柱层析效果 | 第36页 |
| 5 结论 | 第36-38页 |
| 致谢 | 第38-39页 |
| 参考文献 | 第39-42页 |
| 作者简介 | 第42页 |
