| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-12页 |
| 第1章 前言 | 第12-24页 |
| ·抗生素生产基因工程改造发展的现状 | 第12-16页 |
| ·红霉素合成的生物学研究状况 | 第16-22页 |
| ·红霉素的生物合成机制 | 第17-19页 |
| ·红霉素生物合成的基因组和转录组学研究 | 第19-20页 |
| ·以工业应用为目的的红霉素生产菌基因工程改造 | 第20-21页 |
| ·本实验室的前期工作 | 第21-22页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第22-24页 |
| 第2章 材料和方法 | 第24-34页 |
| ·实验材料 | 第24-27页 |
| ·菌种与质粒 | 第24-25页 |
| ·实验仪器设备 | 第25页 |
| ·培养基及培养条件 | 第25-26页 |
| ·试剂 | 第26页 |
| ·溶液 | 第26-27页 |
| ·实验方法 | 第27-34页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第27-28页 |
| ·大肠杆菌质粒的制备 | 第28页 |
| ·DNA电泳 | 第28页 |
| ·DNA的酶切和连接 | 第28页 |
| ·PCR产物的克隆 | 第28-29页 |
| ·大肠杆菌的P1转导 | 第29页 |
| ·序列分析 | 第29页 |
| ·S.erythraea HL3168 E3孢子的制备 | 第29页 |
| ·S.erythraea HL3168 E3和E.coli的属间接合转移 | 第29页 |
| ·S.erythraea HL3168双交换菌株的筛选 | 第29-30页 |
| ·S.erythraea总DNA的制备 | 第30页 |
| ·蔗糖梯度离心分离纯化DNA片段 | 第30-31页 |
| ·文库的包装、转染 | 第31页 |
| ·核酸分子杂交 | 第31-32页 |
| ·红色糖多孢菌S.erythraea的摇瓶发酵方法 | 第32页 |
| ·红色糖多孢菌S.erythraea发酵液的处理及液相和液质检测 | 第32-33页 |
| ·红霉素发酵液生物效价测定 | 第33-34页 |
| 第3章 红色糖多孢菌中基于ΦC31位点特异性重组酶介导的基因重组插入盒的构建 | 第34-43页 |
| ·ΦC31整合酶所识别特异位点attB序列的导入 | 第35-38页 |
| ·双交换质粒的构建 | 第35-37页 |
| ·双交换突变株的基因型验证 | 第37-38页 |
| ·位点特异性重组的有效性验证 | 第38-40页 |
| ·双交换菌株对红霉素发酵产量的影响 | 第40页 |
| ·本章小结 | 第40-43页 |
| 第4章 ΦC31整合酶介导的盒式插入在提高红色糖多孢菌红霉素发酵组份纯度上的应用 | 第43-60页 |
| ·采用ΦC31位点特异性重组的盒式插入强化羟化酶EryK及甲基化酶EryG的表达 | 第43-48页 |
| ·重组菌的构建 | 第43-45页 |
| ·重组菌发酵结果分析 | 第45-48页 |
| ·甲基化酶eryG基因在红色糖多孢菌中的诱导表达体系 | 第48-50页 |
| ·重组菌的构建 | 第49-50页 |
| ·重组菌发酵结果分析 | 第50页 |
| ·辅助因子对红霉素组份的影响 | 第50-56页 |
| ·重组菌的构建 | 第51-55页 |
| ·重组菌发酵结果分析 | 第55-56页 |
| ·本章小结 | 第56-60页 |
| 第5章 次级代谢基因拷贝数倍增对红霉素合成的影响 | 第60-72页 |
| ·红色糖多孢菌S.erythraea HL3168 E3 cosmid基因组文库的构建及含红霉素聚酮合成酶PKS黏粒的筛选 | 第61-65页 |
| ·S.erythraea HL3168 E3总DNA的抽提 | 第61-62页 |
| ·总DNA插入片段的制备 | 第62-64页 |
| ·基因组文库的包装 | 第64-65页 |
| ·含红霉素基因簇cosmid的筛选 | 第65页 |
| ·倍增红霉素聚酮合成酶PKS拷贝数菌株的构建 | 第65-66页 |
| ·重组菌S.erythraea E3-C5的发酵结果分析 | 第66-67页 |
| ·生物效价分析 | 第66-67页 |
| ·重组菌株红霉素组份分析 | 第67页 |
| ·本章小结 | 第67-72页 |
| 第6章 调节红霉素前体合成的代谢工程初步研究 | 第72-100页 |
| ·甲基丙二酰辅酶A变位酶(Mutase) | 第73-80页 |
| ·重组菌株的构建 | 第75-79页 |
| ·重组菌的表型与红霉素产量 | 第79页 |
| ·讨论 | 第79-80页 |
| ·丙酰辅酶A羧化酶(Caboxylase) | 第80-88页 |
| ·重组菌株的构建 | 第81-85页 |
| ·重组菌株红霉素发酵结果 | 第85页 |
| ·讨论 | 第85-88页 |
| ·甲基丙二酰辅酶A异构酶(Epimerase) | 第88-91页 |
| ·重组菌株的构建 | 第88-90页 |
| ·重组菌S.erythraea E3-epi发酵结果 | 第90页 |
| ·讨论 | 第90-91页 |
| ·丙酸激酶(propionate kinase) | 第91-96页 |
| ·强化表达丙酸激酶重组菌株的构建 | 第92-95页 |
| ·重组菌株S.erythraea E3-Kinase发酵结果 | 第95-96页 |
| ·讨论 | 第96页 |
| ·本章小结 | 第96-100页 |
| 第7章 调控因子对红霉素合成影响的初步探索 | 第100-109页 |
| ·RelA蛋白 | 第100-105页 |
| ·RelA蛋白的强化表达 | 第100-104页 |
| ·RelA基因拷贝数的倍增 | 第104-105页 |
| ·BldD蛋白的组成型强化表达对红霉素合成的影响 | 第105-107页 |
| ·重组菌株的构建 | 第105-107页 |
| ·发酵结果 | 第107页 |
| ·本章小结 | 第107-109页 |
| 第8章 红霉素在大肠杆菌中异源合成的优化 | 第109-118页 |
| ·插入sfp基因至prp操纵子区以构建基因工程菌宿主 | 第111-113页 |
| ·摇瓶考查不同宿主6-脱氧红霉内酯的产量 | 第113页 |
| ·红霉素聚酮合成酶三个亚基DEBS1、DEBS2和DEBS3的表达与丙酸盐转化为6-脱氧红霉内酯的得率在不同宿主细胞里的比较 | 第113-115页 |
| ·6-脱氧红霉内酯的理论得率 | 第115页 |
| ·本章小结 | 第115-118页 |
| 第9章 结论与展望 | 第118-121页 |
| 参考文献 | 第121-128页 |
| 致谢 | 第128-129页 |
| 博士阶段发表的论文和专利 | 第129页 |
