| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 英文缩略表 | 第12-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-18页 |
| 1.1 黄萎病及其危害 | 第13页 |
| 1.2 大丽轮枝菌形态与侵染特性 | 第13-14页 |
| 1.3 大丽轮枝菌致病机理研究进展 | 第14-15页 |
| 1.4 MAPK基因与致病机理 | 第15-16页 |
| 1.5 大丽轮枝菌MAPK基因与黄萎病 | 第16-17页 |
| 1.6 本研究的目的意义 | 第17-18页 |
| 第二章 大丽轮枝菌VDG1特异激酶基因的预测与表达分析 | 第18-27页 |
| 2.1 引言 | 第18页 |
| 2.2 实验材料 | 第18页 |
| 2.3 实验方法 | 第18-23页 |
| 2.3.1 大丽轮枝菌培养与基因组DNA的提取 | 第18-19页 |
| 2.3.2 特异基因的PCR验证 | 第19-20页 |
| 2.3.3 大丽轮枝菌的诱导培养 | 第20页 |
| 2.3.4 大丽轮枝菌侵染寄主棉花 | 第20-21页 |
| 2.3.5 RNA的提取 | 第21页 |
| 2.3.6 cDNA的合成与表达检测 | 第21-23页 |
| 2.4 实验结果 | 第23-25页 |
| 2.4.1 5个激酶基因的激酶结构域分析 | 第23页 |
| 2.4.2 高致病型大丽轮枝菌特异激酶基因PCR鉴定 | 第23-24页 |
| 2.4.3 高致病型大丽轮枝菌特异激酶基因表达分析 | 第24-25页 |
| 2.5 讨论 | 第25-27页 |
| 第三章 高致病型大丽轮枝菌特异激酶基因突变株的构建 | 第27-48页 |
| 3.1 实验材料 | 第27页 |
| 3.2 实验方法 | 第27-37页 |
| 3.2.1 大丽轮枝菌基因组DNA的提取 | 第27页 |
| 3.2.2 大丽轮枝菌特异激酶基因上下游及潮霉素抗性基因盒序列扩增 | 第27-30页 |
| 3.2.3 三片段融合 | 第30页 |
| 3.2.4 巢式PCR扩增三片段融合产物 | 第30-31页 |
| 3.2.5 同源重组载体构建 | 第31-32页 |
| 3.2.6 重组质粒的大肠杆菌转化及阳性克隆筛选 | 第32页 |
| 3.2.7 重组质粒的提取及测序 | 第32-33页 |
| 3.2.8 重组质粒导入农杆菌 | 第33页 |
| 3.2.9 农杆菌介导的大丽轮枝菌的遗传转化 | 第33-34页 |
| 3.2.10 转化子单孢纯化及分子鉴定 | 第34-36页 |
| 3.2.11 突变体生长表型鉴定 | 第36页 |
| 3.2.12 突变体产孢量测定 | 第36页 |
| 3.2.13 突变体致病力测定 | 第36-37页 |
| 3.3 实验结果 | 第37-45页 |
| 3.3.1 高致病型大丽轮枝菌VDG1特异激酶基因敲除质粒的构建 | 第37-38页 |
| 3.3.2 基因敲除转化子的筛选 | 第38-40页 |
| 3.3.3 基因敲除转化子的分子鉴定 | 第40-41页 |
| 3.3.4 突变体表型鉴定 | 第41-43页 |
| 3.3.5 突变体产孢量测定 | 第43-44页 |
| 3.3.6 突变体致病力测定 | 第44-45页 |
| 3.4 讨论 | 第45-48页 |
| 第四章 大丽轮枝菌VDG1特异激酶基因VdHpk1突变株功能互补研究 | 第48-59页 |
| 4.1 实验材料 | 第48页 |
| 4.2 实验方法 | 第48-54页 |
| 4.2.1 RNA的提取及cDNA合成与检测 | 第48页 |
| 4.2.2 TrpC启动子和Nos终止子原件的扩增 | 第48-49页 |
| 4.2.3 骨架载体pCAM-neo和TrpC启动子的重组 | 第49-50页 |
| 4.2.4 骨架载体和Nos终止子的重组 | 第50-51页 |
| 4.2.5 特异激酶基因VdHpkl的克隆 | 第51页 |
| 4.2.6 互补载体的构建 | 第51-52页 |
| 4.2.7 互补质粒导入农杆菌 | 第52页 |
| 4.2.8 农杆菌介导的大丽轮枝菌遗传转化及转化子筛选 | 第52-53页 |
| 4.2.9 互补转化子的分子鉴定 | 第53-54页 |
| 4.2.10 互补转化子的表型鉴定和致病力鉴定 | 第54页 |
| 4.3 实验结果 | 第54-57页 |
| 4.3.1 互补载体的构建 | 第54-55页 |
| 4.3.2 互补突变体的筛选和鉴定 | 第55页 |
| 4.3.3 互补转化子表型鉴定 | 第55-56页 |
| 4.3.4 互补转化子致病力鉴定 | 第56-57页 |
| 4.4 讨论 | 第57-59页 |
| 第五章 全文结论 | 第59-61页 |
| 1. 研究结论 | 第59-60页 |
| 2. 后续工作 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-67页 |
| 附录Ⅰ | 第67-68页 |
| 附录Ⅱ | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 作者简历 | 第70页 |
