| 摘要 | 第3-4页 |
| ABSTRACT | 第4-5页 |
| 第1章 前言 | 第9-22页 |
| 1.1 草甘膦概述 | 第9-12页 |
| 1.1.1 草甘膦理化性质及应用现状 | 第9-10页 |
| 1.1.2 草甘膦的毒性机理 | 第10-11页 |
| 1.1.3 草甘膦的毒性研究现状 | 第11-12页 |
| 1.2 国内外降解草甘膦的微生物及草甘膦降解基因的研究进展 | 第12-18页 |
| 1.2.1 草甘膦的降解途径 | 第12-13页 |
| 1.2.2 降解草甘膦微生物研究现状 | 第13-14页 |
| 1.2.3 来源于微生物降解草甘膦的基因 | 第14-18页 |
| 1.2.4 降解草甘膦微生物的用途 | 第18页 |
| 1.3 毕赤酵母表达系统简介 | 第18-20页 |
| 1.4 本课题立项背景及意义 | 第20-21页 |
| 1.5 课题的主要研究内容 | 第21-22页 |
| 第2章 多株米曲霉草甘膦降解率测定及甘氨酸氧化酶的生物信息学分析 | 第22-35页 |
| 2.1 引言 | 第22页 |
| 2.2 试验试剂与仪器设备 | 第22-23页 |
| 2.2.1 菌种来源 | 第22页 |
| 2.2.2 试剂 | 第22页 |
| 2.2.3 培养基 | 第22-23页 |
| 2.2.4 仪器设备 | 第23页 |
| 2.3 试验方法 | 第23-27页 |
| 2.3.1 引物设计 | 第23-24页 |
| 2.3.2 孢子悬浮液制备 | 第24页 |
| 2.3.3 米曲霉菌株的培养 | 第24页 |
| 2.3.4 不同米曲霉菌株草甘膦降解率测定 | 第24-25页 |
| 2.3.5 米曲霉 DNA 提取 | 第25-26页 |
| 2.3.6 不同米曲霉的甘氨酸氧化酶基因 PCR 扩增 | 第26页 |
| 2.3.7 琼脂糖凝胶回收 | 第26页 |
| 2.3.8 基因测序及甘氨酸氧化酶的生物信息学分析 | 第26-27页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第27-33页 |
| 2.4.1 引物设计 | 第27页 |
| 2.4.2 不同米曲霉菌株降解率的测定 | 第27-29页 |
| 2.4.3 甘氨酸氧化酶基因 PCR 扩增 | 第29页 |
| 2.4.4 基因测序及生物信息学分析 | 第29-33页 |
| 2.5 本章小结 | 第33-35页 |
| 第3章 米曲霉 A-F04 甘氨酸氧化酶的毕赤酵母表达载体构建 | 第35-49页 |
| 3.1 引言 | 第35页 |
| 3.2 试验试剂与仪器设备 | 第35-39页 |
| 3.2.1 菌种和质粒 | 第35页 |
| 3.2.2 试剂和引物 | 第35-36页 |
| 3.2.3 培养基和溶液 | 第36-38页 |
| 3.2.4 仪器设备 | 第38-39页 |
| 3.3 试验方法 | 第39-43页 |
| 3.3.1 米曲霉 A-F04 DNA 提取 | 第39页 |
| 3.3.2 GO 基因 PCR 扩增 | 第39页 |
| 3.3.3 PCR 产物和表达载体 pPIC9K 双酶切 | 第39-40页 |
| 3.3.4 双酶切产物连接 | 第40-41页 |
| 3.3.5 大肠杆菌 DH5α感受态细胞的制备 | 第41页 |
| 3.3.6 重组质粒 pPIC9K-AFGO 的大肠杆菌 DH5α转化 | 第41页 |
| 3.3.7 大肠杆菌阳性克隆的筛选与鉴定 | 第41-42页 |
| 3.3.8 提取重组质粒 pPlC9K-AFGO | 第42页 |
| 3.3.9 重组质粒 pPlC9K-AFGO 的 PCR 鉴定和测序 | 第42-43页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第43-48页 |
| 3.4.1 米曲霉 A-F04 菌体形态 | 第43-44页 |
| 3.4.2 米曲霉 A-F04 PCR 扩增 | 第44页 |
| 3.4.3 大肠杆菌阳性克隆的筛选与鉴定 | 第44-45页 |
| 3.4.4 提取含甘氨酸氧化酶基因片段的重组质粒 pPlC9K-AFGO | 第45-46页 |
| 3.4.5 重组质粒 pPlC9K-AFGO 的 PCR 鉴定 | 第46-47页 |
| 3.4.6 重组质粒 pPlC9K-AFGO 的测序分析 | 第47-48页 |
| 3.5 本章小结 | 第48-49页 |
| 第4章 米曲霉 A-F04 甘氨酸氧化酶的毕赤酵母工程菌株构建 | 第49-54页 |
| 4.1 引言 | 第49页 |
| 4.2 试验材料 | 第49-51页 |
| 4.2.1 试剂 | 第49页 |
| 4.2.2 培养基 | 第49-50页 |
| 4.2.3 仪器设备 | 第50-51页 |
| 4.3 试验方法 | 第51-53页 |
| 4.3.1 毕赤酵母 GS115 感受态制备 | 第51页 |
| 4.3.2 重组质粒 pPIC9K-AFGO 的 Sac I 线性化 | 第51页 |
| 4.3.3 线性化 pPIC9K-AFGO 的毕赤酵母 GS115 转化 | 第51-52页 |
| 4.3.4 毕赤酵母工程菌株 GS115-AFGO 的筛选 | 第52-53页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第53-54页 |
| 4.4.1 毕赤酵母工程菌株 GS115-AFGO 的筛选 | 第53-54页 |
| 第5章 结论与展望 | 第54-56页 |
| 5.1 本文结论 | 第54-55页 |
| 5.2 下步工作方向 | 第55-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-61页 |
