| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 第一部分 引言 | 第13-23页 |
| 1 鸭瘟及其诊断方法 | 第13-14页 |
| 1.1 鸭瘟简述 | 第13页 |
| 1.2 实验室诊断方法 | 第13-14页 |
| 2 疱疹病毒的潜伏感染 | 第14-16页 |
| 2.1 疱疹病毒简述 | 第14-15页 |
| 2.2 潜伏感染及相关基因 | 第15-16页 |
| 3 ICP4基因研究进展 | 第16-18页 |
| 3.1 ICP4基因特点 | 第16-17页 |
| 3.2 ICP4基因功能简述 | 第17-18页 |
| 4 UL48基因研究进展 | 第18-22页 |
| 4.1 UL48基因及其蛋白特点 | 第18-19页 |
| 4.2 UL48基因功能简述 | 第19-22页 |
| 5 本研究的目的意义 | 第22-23页 |
| 第二部分 试验研究 | 第23-48页 |
| 实验一 DPV ICP4基因类型鉴定 | 第23-28页 |
| 1 试验材料 | 第23-24页 |
| 1.1 实验动物、毒株 | 第23页 |
| 1.2 试剂和耗材 | 第23页 |
| 1.3 主要试剂的配置 | 第23-24页 |
| 1.4 实验仪器 | 第24页 |
| 2 试验方法 | 第24-26页 |
| 2.1 引物的设计与合成 | 第24页 |
| 2.2 鸭胚成纤维细胞的培养 | 第24-25页 |
| 2.3 DPV-CHv强毒株的增殖 | 第25页 |
| 2.4 病毒的感染 | 第25页 |
| 2.5 RNA的提取及完整性检测 | 第25页 |
| 2.6 反转录反应 | 第25-26页 |
| 2.7 PCR鉴定基因类型 | 第26页 |
| 3 结果 | 第26-27页 |
| 3.1 引物的设计 | 第26页 |
| 3.2 总RNA完整性检测 | 第26页 |
| 3.3 ICP4基因类型确定 | 第26-27页 |
| 4 讨论 | 第27-28页 |
| 实验二 基于ICP4、UL48基因荧光定量PCR方法建立 | 第28-37页 |
| 1 试验材料 | 第28页 |
| 1.1 实验质粒 | 第28页 |
| 1.2 试剂和耗材 | 第28页 |
| 1.3 实验仪器 | 第28页 |
| 2 试验方法 | 第28-30页 |
| 2.1 引物设计与合成 | 第28页 |
| 2.2 ICP4基因克隆与鉴定 | 第28-29页 |
| 2.2.1 PCR扩增 | 第28页 |
| 2.2.2 大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备 | 第28页 |
| 2.2.3 PCR产物的回收、连接与转化 | 第28-29页 |
| 2.2.4 重组质粒的筛选及鉴定 | 第29页 |
| 2.3 FQ-PCR条件优化 | 第29页 |
| 2.4 标准曲线的绘制 | 第29-30页 |
| 2.5 重复性检测 | 第30页 |
| 2.6 特异性效果检测 | 第30页 |
| 2.7 灵敏度检测 | 第30页 |
| 3 结果 | 第30-36页 |
| 3.1 PCR引物的设计与合成 | 第30-31页 |
| 3.2 FQ-PCR引物特异性分析 | 第31页 |
| 3.3 ICP4基因的扩增 | 第31-32页 |
| 3.4 ICP4基因的克隆与鉴定 | 第32页 |
| 3.5 FQ-PCR条件优化 | 第32-33页 |
| 3.6 实时荧光定量PCR标准曲线的构建 | 第33-34页 |
| 3.7 FQ-PCR方法重复性 | 第34-35页 |
| 3.8 FQ-PCR特异性评估 | 第35页 |
| 3.9 灵敏度检测 | 第35-36页 |
| 4 讨论 | 第36-37页 |
| 实验三 鸭临床样品鸭瘟病毒的检测 | 第37-40页 |
| 1 试验材料 | 第37页 |
| 1.1 实验动物 | 第37页 |
| 1.2 试剂和耗材 | 第37页 |
| 1.3 主要试剂的配置 | 第37页 |
| 2 试验方法 | 第37-38页 |
| 2.1 临床样品的收集 | 第37-38页 |
| 2.2 样品DNA的提取 | 第38页 |
| 2.3 FQ-PCR检测 | 第38页 |
| 3 结果 | 第38-39页 |
| 4 讨论 | 第39-40页 |
| 实验四 鸭瘟潜伏感染鸭三叉神经中病毒基因表达检测 | 第40-48页 |
| 1 试验材料 | 第40页 |
| 1.1 实验动物、毒株、质粒 | 第40页 |
| 1.2 试剂和耗材 | 第40页 |
| 2 试验方法 | 第40-41页 |
| 2.1 鸭瘟潜伏感染模型的建立 | 第40页 |
| 2.2 样品收集 | 第40页 |
| 2.2.1 泄殖腔拭子收集 | 第40页 |
| 2.2.2 血液与组织收集 | 第40页 |
| 2.3 样品核酸的提取 | 第40-41页 |
| 2.3.1 DNA提取 | 第40-41页 |
| 2.3.2 组织RNA提取与反转录 | 第41页 |
| 2.4 TK和gC标准曲线的绘制 | 第41页 |
| 2.5 FQ-PCR检测 | 第41页 |
| 3 结果 | 第41-45页 |
| 3.1 鸭体温变化 | 第41-42页 |
| 3.2 泄殖腔拭子、血液病毒DNA含量 | 第42页 |
| 3.3 TK和gC标准曲线的绘制 | 第42-43页 |
| 3.4 鸭三叉神经中鸭瘟病毒ICP4、UL48、TK、gC基因mRNA表达量 | 第43-45页 |
| 4 讨论 | 第45-48页 |
| 4.1 鸭瘟病毒潜伏感染模型的建立 | 第45页 |
| 4.2 鸭瘟潜伏感染部位的选择 | 第45-46页 |
| 4.3 FQ-PCR方法检测DPV 4种基因于潜伏感染时的表达情况 | 第46-48页 |
| 第三部分 结论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-56页 |
| 致谢 | 第56页 |
