| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 第一章 前言 | 第11-23页 |
| 1.1 细胞凋亡 | 第11页 |
| 1.2 细胞凋亡的形态特征 | 第11-12页 |
| 1.3 TNF-alpha | 第12-15页 |
| 1.4 p53在细胞凋亡中的途径和作用 | 第15-16页 |
| 1.5 FADD在细胞凋亡中的途径和作用 | 第16-17页 |
| 1.6 Caspase是凋亡重要的效应分子 | 第17-19页 |
| 1.6.1 Caspase | 第17页 |
| 1.6.2 Caspase家族的结构与分类与特点 | 第17-18页 |
| 1.6.3 Caspase活化机制 | 第18-19页 |
| 1.7 细胞凋亡中的线粒体途径 | 第19-20页 |
| 1.8 TGF-beta/smad signaling | 第20-21页 |
| 1.9 已有的实验工作简介 | 第21-23页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第23-37页 |
| 2.1 材料 | 第23-26页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第23页 |
| 2.1.2 缓冲液和培养基 | 第23页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第23-24页 |
| 2.1.4 酶类和试剂盒 | 第24页 |
| 2.1.5 其他试剂 | 第24-25页 |
| 2.1.6 生物信息学分析的主要软件与数据库 | 第25-26页 |
| 2.2 方法 | 第26-37页 |
| 2.2.1 载体构建 | 第26-31页 |
| 2.2.2 抗体制备 | 第31-32页 |
| 2.2.3 细胞的培养与转化 | 第32页 |
| 2.2.4 SDS-PAGE | 第32-33页 |
| 2.2.5 免疫印迹 | 第33-34页 |
| 2.2.6 免疫共沉淀、内源性的免疫共沉淀和免疫沉淀 | 第34-35页 |
| 2.2.7 荧光素酶报告系统分析 | 第35页 |
| 2.2.8 核质分离检测 | 第35-36页 |
| 2.2.9 Hoechst33258染核检测凋亡 | 第36页 |
| 2.2.10 亚细胞共定位 | 第36-37页 |
| 第三章 结果与分析 | 第37-56页 |
| 3.1 Hoechst33258分析CXXC5基因在HEK293细胞系中对细胞凋亡的影响 | 第37-40页 |
| 3.2 CXXC5蛋白通过TNF-a膜受体通路诱导细胞凋亡 | 第40-41页 |
| 3.3 Western blot分析表明CXXC5蛋白不激活p53表达 | 第41-42页 |
| 3.4 Western blot分析表明CXXC5蛋白不激活FADD表达,CXXC | 第42-44页 |
| 3.4.1 CXXC5蛋白不激活FADD表达 | 第42-43页 |
| 3.4.2 IP分析表明,CXXC5不与FADD形成复合物 | 第43-44页 |
| 3.5 RNAi干扰内源性CXXC5的表达导致Caspase3的蛋白表达水平降低 | 第44-45页 |
| 3.6 CXXC5蛋白不通过线粒体途径诱导细胞凋亡 | 第45-47页 |
| 3.7 SMAD3,SAMD4与CXXC5的相互作用研究 | 第47-53页 |
| 3.7.1 SMAD3,SAMD4与CXXC5的共转染激活TNF-a转录活性 | 第47页 |
| 3.7.2 CXXC5蛋白不激活SMAD4表达,但是激活磷酸化的SMAD3的表达 | 第47-48页 |
| 3.7.3 SMAD与CXXC5的相互作用 | 第48-53页 |
| 3.8 制备CXXC5的多克隆抗体 | 第53-56页 |
| 第四章 结语和讨论 | 第56-59页 |
| 参考文献 | 第59-67页 |
| 附录一 | 第67-68页 |
| 附录二 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69-71页 |
