| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 第1章 文献综述 | 第10-24页 |
| 1.1 PNPase研究背景 | 第10-12页 |
| 1.1.1 PNPase的结构及氨基酸组成 | 第11-12页 |
| 1.1.2 PNPase的医学价值 | 第12页 |
| 1.2 重组大肠杆菌高密度培养技术 | 第12-15页 |
| 1.2.1 影响大肠杆菌高密度培养的主要因素 | 第12-14页 |
| 1.2.2 培养技术 | 第14-15页 |
| 1.2.3 提高E.coli高密度生长的分子策略 | 第15页 |
| 1.3 微生物基本营养 | 第15-18页 |
| 1.3.1 碳源 | 第15-16页 |
| 1.3.2 氮源 | 第16-17页 |
| 1.3.3 能源与水 | 第17页 |
| 1.3.4 矿质元素与生长因子 | 第17-18页 |
| 1.4 有关营养调节机制 | 第18-21页 |
| 1.4.1 细菌中的氮源调节 | 第18-20页 |
| 1.4.2 细菌的应急反应/紧缩响应 | 第20-21页 |
| 1.5 离子对色谱法 | 第21-23页 |
| 1.5.1 高效液相色谱简介 | 第21-22页 |
| 1.5.2 离子对色谱法原理 | 第22页 |
| 1.5.3 离子对试剂的选择 | 第22-23页 |
| 1.6 本文研究目的及内容 | 第23-24页 |
| 第2章 材料与方法 | 第24-33页 |
| 2.1 材料 | 第24-26页 |
| 2.1.1 菌种 | 第24页 |
| 2.1.2 培养基及培养条件 | 第24页 |
| 2.1.3 实验试剂及器材 | 第24-25页 |
| 2.1.4 实验仪器 | 第25-26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-33页 |
| 2.2.1 发酵流程 | 第26-27页 |
| 2.2.2 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第27-29页 |
| 2.2.3 PNPase酶活的测定 | 第29-33页 |
| 第3章 发酵过程参数优化 | 第33-36页 |
| 3.1 溶氧水平的影响 | 第33-34页 |
| 3.1.1 DO对菌体生长的影响 | 第33-34页 |
| 3.1.2 DO对蛋白含量的影响 | 第34页 |
| 3.1.3 DO对发酵液酶活的影响 | 第34页 |
| 3.2 溶氧水平与限制性底物之间的关系 | 第34-35页 |
| 3.3 小结 | 第35-36页 |
| 第4章 复合培养基的研究 | 第36-43页 |
| 4.1 培养基结构的影响 | 第36-38页 |
| 4.1.1 碳氮比对菌体生长的影响 | 第36-37页 |
| 4.1.2 不同C/N比对蛋白含量的影响 | 第37页 |
| 4.1.3 不同C/N比对发酵液酶活的影响 | 第37-38页 |
| 4.2 无机盐的影响 | 第38-39页 |
| 4.2.1 K、Na、Ca、P浓度对菌体生长的影响 | 第38页 |
| 4.2.2 K、Na、Ca、P浓度对蛋白含量的影响 | 第38-39页 |
| 4.2.3 K、Na、Ca、P浓度对发酵液酶活的影响 | 第39页 |
| 4.3 有机氮无机氮比的影响 | 第39-41页 |
| 4.3.1 有机氮无机氮比对菌体生长的影响 | 第39-40页 |
| 4.3.2 有机氮无机氮比对蛋白含量的影响 | 第40-41页 |
| 4.3.3 有机氮无机氮比对发酵液酶活的影响 | 第41页 |
| 4.4 小结 | 第41-43页 |
| 第5章 合成培养基的研究 | 第43-53页 |
| 5.1 合成培养基的初步优化 | 第43-48页 |
| 5.1.1 微量元素的影响 | 第43-44页 |
| 5.1.2 不同碳氮比的影响 | 第44-46页 |
| 5.1.3 主要矿质元素的影响 | 第46-48页 |
| 5.2 复合培养基与合成培养基的比较 | 第48-51页 |
| 5.2.1 碳氮比的比较 | 第48-49页 |
| 5.2.2 有机氮无机氮的比较 | 第49-51页 |
| 5.3 本章小结 | 第51-53页 |
| 第6章 基于细胞内关键代谢物的研究 | 第53-63页 |
| 6.1 离子对色谱法分离细胞内α-酮戊二酸 | 第53-58页 |
| 6.1.1 代谢物的灭活 | 第53页 |
| 6.1.2 抽提方法的选择 | 第53-54页 |
| 6.1.3 色谱分析柱的选择 | 第54页 |
| 6.1.4 柱温及波长的选择 | 第54页 |
| 6.1.5 流动相的选择 | 第54-56页 |
| 6.1.6 α-酮戊二酸的标准曲线 | 第56-57页 |
| 6.1.7 目标物侧面确证实验 | 第57页 |
| 6.1.8 稳定性实验 | 第57-58页 |
| 6.1.9 精密度实验 | 第58页 |
| 6.1.10 回收率实验 | 第58页 |
| 6.2 不同营养条件下发酵过程α-酮戊二酸含量变化 | 第58-62页 |
| 6.2.1 复合培养基条件下发酵过程AKG变化 | 第58-60页 |
| 6.2.2 合成培养基条件下发酵过程AKG变化 | 第60-61页 |
| 6.2.3 基于不同培养基下α-酮戊二酸变化的分析 | 第61-62页 |
| 6.3 小结 | 第62-63页 |
| 第7章 结论与展望 | 第63-65页 |
| 7.1 结论 | 第63-64页 |
| 7.2 展望 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
