| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一部分 背景 | 第9-20页 |
| 一、朊病毒疾病的种类 | 第9-11页 |
| 1 疯牛病 | 第9-10页 |
| 2 羊瘙痒病 | 第10页 |
| 3 猫科动物海绵状脑病 | 第10-11页 |
| 4 变异型克雅氏病 | 第11页 |
| 二、朊蛋白基因的研究进展 | 第11-15页 |
| 1 PRNP基因的功能及其与朊病毒疾病的关系 | 第11-14页 |
| 2 黄牛和水牛PRNP基因转录前后表达差异的研究 | 第14-15页 |
| 三、MicroRNA与朊病毒疾病 | 第15-19页 |
| 1 MicroRNA的产生 | 第15-17页 |
| 2 miRNA的特点 | 第17页 |
| 3 miRNA与朊病毒疾病的关系 | 第17-19页 |
| 四、本研究目的 | 第19-20页 |
| 第二部分 实验材料和方法 | 第20-43页 |
| 1 实验材料 | 第20-23页 |
| 1.1 实验样品 | 第20-21页 |
| 1.2 主要仪器 | 第21-22页 |
| 1.3 主要试剂 | 第22-23页 |
| 1.4 主要试剂盒 | 第23页 |
| 2 实验方法 | 第23-43页 |
| 2.1 用于3'RACE的cDNA的制备 | 第23-25页 |
| 2.2 用于miRNA表达量分析的cDNA的制备 | 第25-26页 |
| 2.3 3'RACE技术确认水牛PRNP基因3'UTR | 第26-27页 |
| 2.4 产物的回收 | 第27-28页 |
| 2.5 测序 | 第28-30页 |
| 2.6 DNA提取 | 第30-31页 |
| 2.7 聚合酶链式反应(PCR)扩增黄牛和水牛PRNP基因3'UTR | 第31-33页 |
| 2.8 聚合酶链式反应(PCR)扩增PRNP3'UTR区固定差异位点 | 第33-35页 |
| 2.8.1 PCR扩增和测序黄牛和水牛UTR-1区 | 第33-34页 |
| 2.8.2 PCR扩增和测序黄牛和水牛UTR-2区 | 第34-35页 |
| 2.9 克隆 | 第35-36页 |
| 2.10 质粒提取 | 第36页 |
| 2.11 miRNA的识别预测 | 第36页 |
| 2.12 荧光双报告载体构建 | 第36-40页 |
| 2.13 细胞转染及荧光双报告检测 | 第40页 |
| 2.14 荧光定量PCR扩增 | 第40-42页 |
| 2.15 miRNA相对表达量的计算 | 第42-43页 |
| 第三部分 实验结果 | 第43-54页 |
| 1 水牛PRNP基因3'UTR的注释 | 第43-45页 |
| 2 黄牛和水牛PRNP基因3'UTR的扩增和测序结果 | 第45-49页 |
| 2.1 PCR扩增和测序结果 | 第45-48页 |
| 2.2 检测UTR-1区在黄牛和水牛群体中的分布情况 | 第48-49页 |
| 2.3 PCR扩增和测序黄牛和水牛UTR-2区的统计 | 第49页 |
| 3 miRNA的识别预测结果 | 第49-50页 |
| 4 miRNA与PRNP基因的靶标关系验证结果 | 第50-52页 |
| 5 miRNA表达分析 | 第52-54页 |
| 第四部分 总结与讨论 | 第54-57页 |
| 参考文献 | 第57-65页 |
| 致谢 | 第65-67页 |
| 在学期间获奖和发表论文情况 | 第67页 |
