| 致谢 | 第5-6页 |
| 中文摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 1 引言 | 第12-16页 |
| 1.1 研究背景和意义 | 第12页 |
| 1.2 自噬的研究现状及问题 | 第12-15页 |
| 1.2.1 自噬的一般机制 | 第12-14页 |
| 1.2.2 AD与自噬 | 第14-15页 |
| 1.3 研究策略与创新点 | 第15-16页 |
| 2 材料 | 第16-21页 |
| 2.1 质粒、菌株及细胞系 | 第16页 |
| 2.2 工具酶与试剂盒 | 第16页 |
| 2.3 要试剂及耗材 | 第16-17页 |
| 2.4 主要实验仪器 | 第17-18页 |
| 2.5 主要溶液配制 | 第18-21页 |
| 3 方法 | 第21-29页 |
| 3.1 技术路线 | 第21页 |
| 3.2 质粒的鉴定 | 第21-22页 |
| 3.3 细胞培养 | 第22-23页 |
| 3.3.1 原代神经元细胞培养 | 第22页 |
| 3.3.2 传代细胞培养 | 第22-23页 |
| 3.4 细胞转染与稳定细胞系的建立 | 第23-24页 |
| 3.5 Aβ寡聚体的制备 | 第24页 |
| 3.6 SDS-PAGE | 第24页 |
| 3.7 Aβ42样品透析 | 第24-25页 |
| 3.8 Aβ42的CD谱分析 | 第25页 |
| 3.9 自噬的诱导及鉴定 | 第25页 |
| 3.10 免疫荧光 | 第25-26页 |
| 3.11 溶酶体示踪 | 第26页 |
| 3.12 细胞总蛋白的提取与测定 | 第26页 |
| 3.13 Western blot检测LC3B、p62及HSP70/90表达 | 第26-27页 |
| 3.14 MTT法检测细胞活力 | 第27页 |
| 3.15 TEM确认自噬超微结构 | 第27页 |
| 3.16 统计学分析 | 第27-29页 |
| 4 结果 | 第29-52页 |
| 4.1 质粒的双酶切鉴定 | 第29页 |
| 4.2 细胞的培养与选择 | 第29-33页 |
| 4.2.1 细胞培养 | 第29-30页 |
| 4.2.2 细胞的选择 | 第30-33页 |
| 4.3 稳定表达EGFP-LC3的HEK293细胞系的建立及鉴定 | 第33-34页 |
| 4.4 圆二色谱法分析Aβ42的二级结构 | 第34-35页 |
| 4.5 Aβ诱导的细胞自噬 | 第35-46页 |
| 4.5.1 细胞内Aβ过量表达及外源Aβ诱导细胞自噬 | 第35-36页 |
| 4.5.2 剂量依赖性 | 第36-38页 |
| 4.5.3 时间依赖性 | 第38页 |
| 4.5.4 Aβ不同聚合时间诱导细胞自噬 | 第38-40页 |
| 4.5.5 TEM检测自噬小体超微结构 | 第40-42页 |
| 4.5.6 截短的Aβ肽诱导EGFP-LC3稳定表达细胞的自噬 | 第42-45页 |
| 4.5.7 巴佛洛霉素A1增强Aβ诱导自噬 | 第45-46页 |
| 4.6 溶酶体示踪与检测 | 第46-48页 |
| 4.7 Western blot检测 | 第48-50页 |
| 4.7.1 Western blot检测LC3BII/I和p62的变化 | 第48-49页 |
| 4.7.2 Western blot检测HSP70/HSP90的变化 | 第49-50页 |
| 4.8 MTT检测Aβ诱导自噬后的细胞活性 | 第50-52页 |
| 5 讨论 | 第52-55页 |
| 6 结论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-59页 |
| 附录 | 第59-61页 |
| 硕士期间发表论文情况 | 第61-62页 |
| 作者简历 | 第62-64页 |
| 学位论文数据集 | 第64页 |
