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柑橘绿霉病菌比较基因组及抗DMI杀菌剂机理研究

致谢第7-11页
摘要第11-14页
Abstract第14-17页
第一章 绪论第18-31页
    1.1 课题背景第18-19页
    1.2 病原真菌侵染果实过程和互作机制第19-24页
        1.2.1 病原真菌侵染和定殖的过程第19-20页
        1.2.2 果皮对真菌侵染和定殖的影响第20-21页
        1.2.3 果实防卫反应的影响第21-22页
        1.2.4 有关果实病原真菌致病机制的研究第22-24页
    1.3 柑橘绿霉病化学防治及病菌抗药性研究第24-29页
        1.3.1 DMI杀菌剂的作用机理第25页
        1.3.2 DMI杀菌剂抗性产生及其机理第25-27页
        1.3.3 靶标基因上调表达机理第27-28页
        1.3.4 柑橘绿霉病菌抗DMI杀菌剂新型分子机理第28-29页
    1.4 高通量测序在揭示病菌致病机理中的应用第29-30页
    1.5 本研究的目的和意义第30-31页
第二章 柑橘绿霉病菌基因组测序和比较基因组分析第31-51页
    2.1 引言第31页
    2.2 材料和方法第31-34页
        2.2.1 菌株及培养条件第31-32页
        2.2.2 DNA提取及基因组测序、组装第32页
        2.2.3 基因预测及注释第32-33页
        2.2.4 基因组共线性、直系同源基因和进化分析第33页
        2.2.5 蛋白家族分类与进化分析第33页
        2.2.6 分泌蛋白预测第33-34页
        2.2.7 次级代谢物合成基因簇预测第34页
        2.2.8 在线数据第34页
    2.3 结果与讨论第34-49页
        2.3.1 柑橘绿霉病菌形态及侵染循环第34-35页
        2.3.2 柑橘绿霉病菌基因组特征第35-37页
        2.3.3 青霉属直系同源基因比较第37-40页
        2.3.4 柑橘绿霉病菌与其他真菌基因组共线性比较第40-41页
        2.3.5 柑橘绿霉病菌致病相关基因第41-43页
        2.3.6 柑橘绿霉病菌细胞壁水解酶第43-46页
        2.3.7 柑橘绿霉病菌毒素合成第46-47页
        2.3.8 柑橘绿霉病菌ABC转运蛋白第47-49页
    2.4 本章小结第49-51页
第三章 柑橘绿霉病菌线粒体基因组第51-59页
    3.1 引言第51页
    3.2 材料与方法第51-52页
        3.2.1 菌株、培养条件、基因组测序第51-52页
        3.2.2 生物信息学分析第52页
    3.3 结果与讨论第52-57页
        3.3.1 线粒体基因特征第52页
        3.3.2 线粒体蛋白编码基因第52-55页
        3.3.3 线粒体内含子及内含子基因第55-57页
        3.3.4 线粒体tRNA基因第57页
        3.3.5 线粒体rRNA基因第57页
    3.4 本章小结第57-59页
第四章 柑橘绿霉病菌比较转录组研究第59-73页
    4.1 引言第59-60页
    4.2 材料与方法第60-61页
        4.2.1 菌株与培养条件第60页
        4.2.2 文库制备和数据分析第60-61页
    4.3 结果与讨论第61-70页
        4.3.1 不同培养基上的转录组差异第61-66页
        4.3.2 不同真菌之间PacC调控差异第66-70页
    4.4 本章小结第70-73页
第五章 柑橘绿霉病菌抗DMI杀菌剂新基因型的发现第73-92页
    5.1 引言第73页
    5.2 材料与方法第73-80页
        5.2.1 菌株、材料及培养方法第73-74页
        5.2.2 培养基第74-75页
        5.2.3 试剂第75-76页
        5.2.4 引物序列第76-77页
        5.2.5 抑霉唑抗性表型和基因型检测第77页
        5.2.6 PdCYP51B和PdCYP51C基因的克隆和序列分析第77页
        5.2.7 实时定量PCR第77-78页
        5.2.8 过表达载体构建第78页
        5.2.9 农杆菌介导的遗传转化第78-79页
        5.2.10 Southern杂交第79-80页
        5.2.11 PCR方法检测柑橘绿霉病菌抗性基因型第80页
    5.3 结果与讨论第80-89页
        5.3.1 柑橘绿霉病菌对抑霉唑抗性及抗性基因型第80-81页
        5.3.2 CYP51同源基因的克隆第81-82页
        5.3.3 PdCYP51B启动子区含有199bp序列插入第82-84页
        5.3.4 199bp插入序列的生物信息学分析第84页
        5.3.5 PdCYP51B基因在IMZ-R3菌株中超量表达第84-85页
        5.3.6 PdCYP51同源基因均能被抑霉唑诱导第85-86页
        5.3.7 过表达PdCYP51B基因降低病菌对抑霉唑的敏感性第86-87页
        5.3.8 基于双重PCR的DMI抗性基因型检测第87-89页
    5.4 本章小结第89-92页
第六章 柑橘绿霉病菌抗DMI杀菌剂新基因型的调控机理第92-103页
    6.1 引言第92-93页
    6.2 材料与方法第93-94页
        6.2.1 菌株和培养方法第93页
        6.2.2 载体构建第93页
        6.2.3 启动子定位第93-94页
        6.2.4 Southern杂交第94页
        6.2.5 生物信息学分析第94页
    6.3 结果与讨论第94-101页
        6.3.1 199bp插入序列是一个转座子第94-95页
        6.3.2 PdMLE1特异且广泛的存在于柑橘绿霉病菌中第95-96页
        6.3.3 PdMLE1是一个强启动子第96-97页
        6.3.4 PdMLE1和PdCYP51B核心启动子区定位第97-99页
        6.3.5 PdMLE1的全基因组插入位点分析第99-101页
    6.4 本章小结第101-103页
第七章 全文总结第103-107页
    7.1 柑橘绿霉病菌基因组测序及比较基因组研究第103-104页
    7.2 柑橘绿霉病菌抗药性研究第104-105页
    7.3 全文创新点第105-106页
    7.4 全文不足之处第106页
    7.5 今后的研究方向第106-107页
参考文献第107-119页
附录第119-127页
研究生期间发表论文第127-128页

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