| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略词表 | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-24页 |
| 1 WRKY转录因子研究进展 | 第11-24页 |
| 1.1 WRKY转录因子家族的结构特点 | 第11-14页 |
| 1.2 WRKY转录因子的起源进化 | 第14页 |
| 1.3 WRKY转录因子家族的生物学功能 | 第14-21页 |
| 1.4 烟草WRKY转录因子的研究概况 | 第21-22页 |
| 1.5 研究的目的及意义 | 第22-23页 |
| 1.6 研究内容 | 第23页 |
| 1.7 研究技术路线 | 第23-24页 |
| 第二章 NtWRKY6基因的克隆及生物信息学分析 | 第24-38页 |
| 1 试验材料 | 第24-26页 |
| 1.1 试验材料和试剂 | 第24页 |
| 1.2 常用试剂配方 | 第24-25页 |
| 1.3 试验中所用的培养基配方 | 第25页 |
| 1.4 常用溶液及缓冲液 | 第25页 |
| 1.5 试验仪器及设备 | 第25-26页 |
| 2 试验方法 | 第26-31页 |
| 2.1 引物设计 | 第26页 |
| 2.2 烟草总RNA提取 | 第26页 |
| 2.3 琼脂糖凝胶电泳检测RNA | 第26-27页 |
| 2.4 RT-PCR | 第27-28页 |
| 2.5 目的片段的回收纯化 | 第28-29页 |
| 2.6 目的片段与T-载体连接 | 第29页 |
| 2.7 连接产物的转化 | 第29-30页 |
| 2.8 阳性克隆的筛选及鉴定 | 第30-31页 |
| 2.9 测序及序列分析 | 第31页 |
| 3 结果分析 | 第31-36页 |
| 3.1 烟草总RNA的提取及鉴定 | 第31-32页 |
| 3.2 目的基因的克隆 | 第32页 |
| 3.3 NtWRKY6序列分析及推导氨基酸序列 | 第32-33页 |
| 3.4 序列相似性分析 | 第33-34页 |
| 3.5 NtWRKY6功能结构域分析 | 第34页 |
| 3.6 NtWRKY6蛋白质的理化性质分析 | 第34-35页 |
| 3.7 NtWRKY6序列多种比对及构建系统进化树 | 第35-36页 |
| 4 讨论 | 第36-37页 |
| 5 小结 | 第37-38页 |
| 第三章 酵母pGBKT7载体构建及转录激活检测 | 第38-46页 |
| 1 试验材料 | 第38-39页 |
| 1.1 试验材料及试剂 | 第38页 |
| 1.2 仪器及设备 | 第38-39页 |
| 2 试验方法 | 第39-42页 |
| 2.1 引物设计 | 第39页 |
| 2.2 烟草总RNA的提取 | 第39页 |
| 2.3 cDNA的获得 | 第39页 |
| 2.4 NtWRKY6基因目的片段的纯化回收 | 第39页 |
| 2.5 克隆载体构建 | 第39页 |
| 2.6 pGBKT7载体的构建 | 第39-41页 |
| 2.7 转录激活检测 | 第41-42页 |
| 2.8 阳性菌株的鉴定及转录激活检测 | 第42页 |
| 3 结果分析 | 第42-44页 |
| 3.1 克隆载体的构建 | 第42-43页 |
| 3.2 pGBKT7载体的构建 | 第43页 |
| 3.3 转录激活检测 | 第43-44页 |
| 4 讨论 | 第44-45页 |
| 5 小结 | 第45-46页 |
| 第四章 NtWRKY6对非生物胁迫的响应 | 第46-53页 |
| 1 试验材料 | 第46-47页 |
| 1.1 植物材料及试剂 | 第46页 |
| 1.2 常用试剂及培养基配方 | 第46-47页 |
| 1.3 试验仪器及设备 | 第47页 |
| 2 试验方法 | 第47-49页 |
| 2.1 试验材料的处理 | 第47-48页 |
| 2.2 NtWRKY6的组织表达 | 第48-49页 |
| 3 结果分析 | 第49-51页 |
| 3.1 低钾胁迫下NtWRKY6基因的表达分析 | 第49页 |
| 3.2 低磷胁迫下NtWRKY6基因的表达分析 | 第49-50页 |
| 3.3 NaCl胁迫下NtWRKY6基因的表达分析 | 第50页 |
| 3.4 PEG胁迫下NtWRKY6基因的表达分析 | 第50页 |
| 3.5 NtWRKY6的组织表达分析 | 第50-51页 |
| 4 讨论 | 第51-52页 |
| 5 小结 | 第52-53页 |
| 第五章 WRKY6对烟草的遗传转化 | 第53-63页 |
| 1 试验材料 | 第53-55页 |
| 1.1 植物材料和试剂 | 第53页 |
| 1.2 菌株及载体 | 第53页 |
| 1.3 常用试剂及培养基配方 | 第53-55页 |
| 1.4 仪器和设备 | 第55页 |
| 2 试验方法 | 第55-59页 |
| 2.1 pBI121-NtWRKY6过表达载体的构建 | 第55页 |
| 2.2 农杆菌感受态的制备 | 第55-56页 |
| 2.3 表达载体pBI121-NtWRKY6转化农杆菌 | 第56页 |
| 2.4 农杆菌侵染叶盘法转目的基因 | 第56-57页 |
| 2.5 转基因植株的鉴定 | 第57-59页 |
| 3 结果分析 | 第59-61页 |
| 3.1 pBI121-NtWRKY6过表达载体的构建 | 第59页 |
| 3.2 表达载体pBI121-NtWRKY6转化农杆菌 | 第59-60页 |
| 3.3 转基因烟草植株的获得 | 第60页 |
| 3.4 转基因烟草PCR检测 | 第60-61页 |
| 4 讨论 | 第61-62页 |
| 5 小结 | 第62-63页 |
| 第六章 结论 | 第63-65页 |
| 1 基因克隆 | 第63页 |
| 2 酵母pGBKT7载体的构建及转录激活检测 | 第63页 |
| 3 NtWRKY6对非生物胁迫的响应 | 第63-64页 |
| 4 WRKY6对烟草的遗传转化 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
