| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 符号说明 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-21页 |
| 1. 颗粒细胞、卵泡及卵母细胞发育 | 第12页 |
| 2. 体外培养颗粒细胞的方法 | 第12-13页 |
| 3. CPEB1 | 第13-14页 |
| 4. CDK1 | 第14-15页 |
| 5. C-MOS | 第15-16页 |
| 6. CYCLIN B1 | 第16-17页 |
| 7. RNA干扰 | 第17-20页 |
| 7.1 RNA干扰的作用机制 | 第17-18页 |
| 7.2 RNA干扰的特征 | 第18-19页 |
| 7.3 RNA干扰的制备方法 | 第19-20页 |
| 8. 本研究的目的和意义 | 第20-21页 |
| 第二章 山羊CPEB1基因载体构建及活性验证 | 第21-40页 |
| 1. 材料与方法 | 第21-34页 |
| 1.1 实验材料 | 第21-23页 |
| 1.1.1 实验动物 | 第21-22页 |
| 1.1.2 实验试剂 | 第22-23页 |
| 1.1.3 实验器材 | 第23页 |
| 1.2 实验方法 | 第23-34页 |
| 1.2.1 真核表达载体pcDNA3.1-CPEB1载体的构建与鉴定 | 第23-29页 |
| 1.2.1.1 CPEB1CDS引物设计 | 第23-24页 |
| 1.2.1.2 山羊颗粒细胞总RNA的提取和检测 | 第24页 |
| 1.2.1.3 山羊颗粒细胞cDNA文库的建立 | 第24-25页 |
| 1.2.1.4 CPEB1基因CDS扩增及回收 | 第25-26页 |
| 1.2.1.5 pGEM-T Vector-CPEB1载体的构建 | 第26-29页 |
| 1.2.1.6 真核表达载体pcDNA3.1-CPEB1的构建与鉴定 | 第29页 |
| 1.2.2 CPEB1基因siRNA的构建 | 第29-31页 |
| 1.2.2.1 CPEB1基因siRNA的设计规则和流程 | 第29-30页 |
| 1.2.2.2 CPEB1基因siRNA合成 | 第30-31页 |
| 1.2.3 CPEB1基因siRNA干扰活性验证 | 第31-34页 |
| 1.2.3.1 山羊卵巢颗粒细胞的分离培养 | 第31页 |
| 1.2.3.2 CPEB1基因siRNA转染山羊卵巢颗粒细胞 | 第31-32页 |
| 1.2.3.3 CPEB1基因siRNA干扰活性验证 | 第32-33页 |
| 1.2.3.4 数据处理 | 第33-34页 |
| 2. 结果 | 第34-38页 |
| 2.1 山羊卵泡颗粒细胞总RNA提取 | 第34-35页 |
| 2.2 真核表达载体pcDNA3.1-CPEB1的构建与鉴定 | 第35-37页 |
| 2.3 CPEB1基因siRNA的合成 | 第37页 |
| 2.4 CPEB1基因siRNA干扰活性的验证 | 第37-38页 |
| 3. 讨论 | 第38-39页 |
| 4. 本章小结 | 第39-40页 |
| 第三章 CPEB1基因对山羊卵巢颗粒细胞增殖的影响 | 第40-56页 |
| 1. 材料与方法 | 第40-46页 |
| 1.1 实验材料 | 第40-42页 |
| 1.1.1 实验动物 | 第40页 |
| 1.1.2 实验试剂 | 第40-41页 |
| 1.1.3 实验器材 | 第41-42页 |
| 1.2 实验方法 | 第42-46页 |
| 1.2.1 CPEB1基因过表达对山羊卵巢颗粒细胞增殖的影响 | 第42-45页 |
| 1.2.1.1 山羊卵巢颗粒细胞的分离培养 | 第42页 |
| 1.2.1.2 过表达载体pcDNA3.1-CPEB1转染山羊卵巢颗粒细胞 | 第42页 |
| 1.2.1.3 qRT-PCR检测增殖相关基因mRNA表达 | 第42-43页 |
| 1.2.1.4 Western Blot检测增殖相关蛋白表达 | 第43-45页 |
| 1.2.2 CPEB1基因敲低对山羊卵巢颗粒细胞增殖的影响 | 第45-46页 |
| 1.2.2.1 山羊卵巢颗粒细胞的分离培养 | 第45页 |
| 1.2.2.2 siCPEB1-3转染山羊卵巢颗粒细胞 | 第45页 |
| 1.2.2.3 qRT-PCR检测增殖相关基因mRNA表达 | 第45页 |
| 1.2.2.4 Western Blot检测增殖相关蛋白表达 | 第45-46页 |
| 1.2.3 数据处理 | 第46页 |
| 2. 结果 | 第46-53页 |
| 2.1 CPEB1基因过表达对山羊卵巢颗粒细胞增殖的影响 | 第46-53页 |
| 2.1.1 qRT-PCR检测相关基因mRNA表达 | 第46-48页 |
| 2.1.2 Western Blot检测相关蛋白表达 | 第48-53页 |
| 2.1.2.1 蛋白标准浓度测定 | 第48-49页 |
| 2.1.2.2 Western Blot检测 | 第49-53页 |
| 3. 讨论 | 第53-55页 |
| 4. 本章小结 | 第55-56页 |
| 全文结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-64页 |
| 附录 | 第64-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 攻读学位期间发表学术论文 | 第69-70页 |
