| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩略词表 | 第7-10页 |
| 1 引言 | 第10-18页 |
| 1.1 产肠毒素性肠大杆菌 ETEC 的致病因子的研究现状 | 第10-11页 |
| 1.1.1 肠毒素的研究现状 | 第10-11页 |
| 1.1.2 粘附素的研究现状 | 第11页 |
| 1.2 ETEC 疫苗研究现状 | 第11-16页 |
| 1.2.1 传统粘附素疫苗的研究现状 | 第12页 |
| 1.2.2 传统肠毒素疫苗的研究现状 | 第12-13页 |
| 1.2.3 基因工程疫苗的研究现状 | 第13页 |
| 1.2.4 DNA 疫苗 | 第13-16页 |
| 1.3 本课题研究的目的和意义 | 第16-17页 |
| 1.4 技术路线 | 第17-18页 |
| 1.4.1 产肠毒素性大肠杆菌 EtpA 与 LT B 基因的克隆及其原核与真核重组表达质粒的构建 | 第17页 |
| 1.4.2 表达 EtpA 与 LT B 的重组质粒在小鼠体内诱导的免疫效果观察 | 第17-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-33页 |
| 2.1 材料 | 第18-22页 |
| 2.1.1 菌种和质粒 | 第18页 |
| 2.1.2 实验动物 | 第18页 |
| 2.1.3 实验所需主要试剂 | 第18-19页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第19-20页 |
| 2.1.5 试验所需主要试剂的配制 | 第20-22页 |
| 2.2 方法 | 第22-33页 |
| 2.2.1 产肠毒素性大肠杆菌 EtpA 与 LT B 基因的原核表达及蛋白纯化 | 第22-29页 |
| 2.2.2 pcDNA-EtpA/pcDNA-LT B 真核表达载体的构建 | 第29页 |
| 2.2.3 表达 EtpA 与 LT B 蛋白重组质粒在小鼠体内诱导的免疫反应 | 第29-33页 |
| 3 结果与分析 | 第33-49页 |
| 3.1 产肠毒素性大肠杆菌 ETPA 与 LT B 基因的原核表达及蛋白纯化 | 第33-37页 |
| 3.1.1 LT B 与 EtpA 基因的 PCR 扩增 | 第33页 |
| 3.1.2 pEA-EtpA 与 pEA-LT B 重组克隆载体的鉴定结果 | 第33-34页 |
| 3.1.3 重组原核表达质粒 pET-EtpA 与 pET-LT B 的鉴定 | 第34页 |
| 3.1.4 测序结果分析 | 第34页 |
| 3.1.5 重组原核表达菌 pET-EtpA/pET-LT B 的诱导表达 | 第34-36页 |
| 3.1.6 重组蛋白表达形式分析及纯化 | 第36-37页 |
| 3.1.7 重组表达蛋白 Western-Blot 鉴定结果 | 第37页 |
| 3.2 产肠毒素性大肠杆菌 ETPA 与 LT B 基因的重组真核表达质粒鉴定 | 第37-38页 |
| 3.2.1 重组真核表达质粒 pcDNA-EtpA/pcDNA-LT B 的鉴定 | 第37-38页 |
| 3.2.2 测序结果分析 | 第38页 |
| 3.3 表达 ETPA 与 LT B 蛋白重组质粒在小鼠体内诱导的免疫反应 | 第38-45页 |
| 3.3.1 DNA 质粒浓度测定结果 | 第38页 |
| 3.3.2 蛋白质浓度测定结果 | 第38-39页 |
| 3.3.3 疫苗性状的测定结果 | 第39页 |
| 3.3.4 采用方阵法确定最佳包被浓度和最佳血清稀释度 | 第39-40页 |
| 3.3.5 抗原最佳包被条件的确 | 第40页 |
| 3.3.6 特异性检测结果 | 第40-41页 |
| 3.3.7 小鼠体内抗体水平检测 | 第41-42页 |
| 3.3.8 脾淋巴细胞增殖试验（MTT）结果 | 第42-43页 |
| 3.3.9 疫苗保护率检测结果 | 第43-45页 |
| 3.4 实验分析 | 第45-49页 |
| 3.4.1 产肠毒素性大肠杆菌 EtpA 与 LT B 基因的原核表达及蛋白纯化 | 第45-46页 |
| 3.4.2 产肠毒素性大肠杆菌 EtpA 与 LT B 基因的真核表达 | 第46页 |
| 3.4.3 表达 EtpA 与 LT B 蛋白重组质粒在小鼠体内诱导的免疫反应 | 第46-49页 |
| 4 结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-55页 |
| 在读期间发表论文 | 第55-56页 |
| 作者简介 | 第56-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
