| 摘要 | 第2-3页 |
| Abstract | 第3-4页 |
| 缩略词表 | 第5-9页 |
| 1 前言 | 第9-16页 |
| 1.1 体细胞克隆技术简介 | 第9-10页 |
| 1.2 核供体细胞对猪克隆效率的影响 | 第10-13页 |
| 1.2.1 供体细胞的来源和种类对猪克隆效率的影响 | 第11页 |
| 1.2.2 供体细胞的细胞周期对猪克隆效率的影响 | 第11-12页 |
| 1.2.3 供体细胞的代数对猪克隆效率的影响 | 第12页 |
| 1.2.4 供体细胞的处理方式对猪克隆效率的影响 | 第12-13页 |
| 1.3 经G418筛选的基因修饰核供体细胞对猪克隆效率的影响 | 第13-15页 |
| 1.4 本研究的目的和主要内容 | 第15-16页 |
| 2 材料与方法 | 第16-24页 |
| 2.1 技术路线 | 第16页 |
| 2.2 实验材料 | 第16-18页 |
| 2.2.1 主要试剂、耗材 | 第16-17页 |
| 2.2.2 主要仪器设备 | 第17页 |
| 2.2.3 分析软件及网站 | 第17-18页 |
| 2.3 方法 | 第18-24页 |
| 2.3.1 猪成体成纤维细胞的准备与处理 | 第18-20页 |
| 2.3.1.1 猪成体成纤维细胞的复苏与培养 | 第18页 |
| 2.3.1.2 猪成体成纤维细胞的G418耐受实验 | 第18页 |
| 2.3.1.3 G418处理猪成体成纤维细胞 | 第18页 |
| 2.3.1.4 猪成体成纤维细胞的细胞周期检测 | 第18-19页 |
| 2.3.1.5 猪成体成纤维细胞中DNA和RNA同时抽提 | 第19-20页 |
| 2.3.2 猪成体成纤维细胞DNA甲基化水平检测 | 第20-21页 |
| 2.3.2.1 DNA亚硫酸盐转化、PCR、克隆及测序 | 第20-21页 |
| 2.3.2.2 数据处理及统计分析 | 第21页 |
| 2.3.3 猪成体成纤维细胞特定基因表达水平检测 | 第21-23页 |
| 2.3.3.1 反转录及定量PCR | 第21-23页 |
| 2.3.3.2 数据处理及统计分析 | 第23页 |
| 2.3.4 猪成体成纤维细胞核移植及其早期胚胎发育能力比较 | 第23-24页 |
| 2.3.4.1 猪成体成纤维细胞核移植及克隆胚胎构建 | 第23页 |
| 2.3.4.2 胚胎培养及发育情况观察 | 第23-24页 |
| 2.3.4.3 数据处理及统计分析 | 第24页 |
| 2.3.5 G418处理后恢复培养对细胞凋亡基因表达水平及胚胎体外发育性能的影响 | 第24页 |
| 3 结果与分析 | 第24-36页 |
| 3.1 猪成体成纤维细胞的G418耐受实验 | 第24-25页 |
| 3.2 G418处理对猪成体成纤维细胞体外培养生长特征的影响 | 第25页 |
| 3.3 G418处理对猪成体成纤维细胞周期的影响 | 第25-26页 |
| 3.4 G418处理对猪成体成纤维细胞特异基因表达的影响 | 第26-28页 |
| 3.4.1 抗氧化酶相关基因 | 第26-27页 |
| 3.4.2 细胞凋亡相关基因 | 第27-28页 |
| 3.5 G418处理对猪成体成纤维细胞DNA甲基化水平的影响 | 第28-33页 |
| 3.5.1 LINE-1 | 第28-29页 |
| 3.5.2 微卫星 | 第29-30页 |
| 3.5.3 XIST基因 | 第30-31页 |
| 3.5.4 Bax基因 | 第31-32页 |
| 3.5.5 DNA甲基化酶相关基因 | 第32-33页 |
| 3.6 G418处理对猪成体成纤维细胞的核移植胚胎体外发育性能的影响 | 第33-34页 |
| 3.7 G418处理结合恢复培养对猪成体成纤维细胞凋亡基因表达的影响 | 第34-35页 |
| 3.8 G418处理结合恢复培养对猪成体成纤维细胞的核移植胚胎体外发育性能的影响 | 第35-36页 |
| 4 讨论与结论 | 第36-41页 |
| 4.1 G418处理对猪成体成纤维细胞周期的影响 | 第36页 |
| 4.2 G418处理与氧化应激及细胞凋亡之间的关系 | 第36-37页 |
| 4.3 G418处理对核供体细胞DNA甲基化重编程的影响 | 第37-38页 |
| 4.4 DNA甲基化测定方法的可靠性 | 第38-40页 |
| 4.5 G418处理供体细胞对其核移植胚胎发育的影响 | 第40-41页 |
| 5 结论 | 第41-42页 |
| 致谢 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-47页 |
