| 缩略语表 | 第6-7页 |
| 中文摘要 | 第7-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 前言 | 第13-14页 |
| 文献回顾 | 第14-27页 |
| 实验一、SPNS2基因的克隆 | 第27-50页 |
| 引言 | 第27-28页 |
| 1 材料 | 第28-31页 |
| 1.1 所用仪器 | 第28页 |
| 1.2 所用到的引物 | 第28-29页 |
| 1.3 所用的实验动物和菌株 | 第29页 |
| 1.4 试剂 | 第29页 |
| 1.5 常用试剂配方 | 第29-31页 |
| 2 方法 | 第31-38页 |
| 2.1 基因组DNA提取方法 | 第31-32页 |
| 2.2 酶切基因组 | 第32-33页 |
| 2.3 连接反应 | 第33页 |
| 2.4 PCR扩增 | 第33-34页 |
| 2.5 PCR产物克隆与pMD18-T载体连接 | 第34页 |
| 2.6 转化大肠杆菌 | 第34-35页 |
| 2.7 质粒提取方法 | 第35页 |
| 2.8 组织RNA提取方法 | 第35-36页 |
| 2.9 Souhern Blot方法 | 第36-38页 |
| 3 实验结果 | 第38-50页 |
| 3.1 绿色荧光蛋白（EGFP）转基因大鼠出现EOB表型 | 第38页 |
| 3.2 大鼠出现EOB表型是基因发生突变的结果 | 第38-40页 |
| 3.3 利用IPCR方法确定转基因载体的插入位点 | 第40-43页 |
| 3.4 序列分析 | 第43-45页 |
| 3.5 扩增载体和基因组DNA的接头片段进一步确定插入位点 | 第45-47页 |
| 3.6 插入位点附近有一个基因SPNS2 | 第47-48页 |
| 3.7 出现EOB表型的绿大鼠不表达SPNS2 | 第48页 |
| 3.8 pCX-EGFP在基因组中只有一个插入位点 | 第48-50页 |
| 实验二、SPNS2在眼睑发育中作用机制的研究 | 第50-78页 |
| 引言 | 第50-51页 |
| 1 材料 | 第51-53页 |
| 1.1 常用仪器 | 第51页 |
| 1.2 常用试剂 | 第51页 |
| 1.3 主要溶液配方 | 第51-53页 |
| 2 方法 | 第53-59页 |
| 2.1 石蜡切片方法 | 第53-54页 |
| 2.2 HE染色方法 | 第54页 |
| 2.3 免疫组化步骤 | 第54-55页 |
| 2.4 原位杂交步骤 | 第55页 |
| 2.5 眼睑组织块体外培养方法 | 第55-56页 |
| 2.6 体内挽救实验 | 第56页 |
| 2.7 角质细胞培养方法 | 第56-57页 |
| 2.8 蛋白质提取方法 | 第57-58页 |
| 2.9 Western Blot方法 | 第58页 |
| 2.10 Adam17活性的测定 | 第58-59页 |
| 3 结果 | 第59-75页 |
| 3.1 SPNS2促进眼睑形成Leading Edge | 第59-61页 |
| 3.2 外源S1P和EGF能够挽救EOB | 第61-63页 |
| 3.3 S1PRs和EGFR信号通路参与到SPNS2影响眼睑发育的信号通路中 | 第63-66页 |
| 3.4 S1P通过S1PRs激活EGFR信号通路 | 第66-68页 |
| 3.5 EGFR和S1PR2-3 参与到眼睑的闭合过程 | 第68-69页 |
| 3.6 S1PRs通过Adam10和Adam17反式激活EGFR信号通路 | 第69-72页 |
| 3.7 在S1P反式激活EGFR信号通路中，TIMP3参与调节Adam10/17的酶活性 | 第72-74页 |
| 3.8 后续的研究工作 | 第74-75页 |
| 4 讨论 | 第75-78页 |
| 小结 | 第78-80页 |
| 参考文献 | 第80-91页 |
| 个人简历和研究成果 | 第91-93页 |
| 致谢 | 第93页 |
