| 摘要 | 第10-11页 |
| 英文摘要 | 第11-12页 |
| 1 引言 | 第13-19页 |
| 1.1 镉的危害 | 第13页 |
| 1.1.1 镉的污染与危害 | 第13页 |
| 1.1.2 镉的毒性 | 第13页 |
| 1.2 镉与内质网应激 | 第13-14页 |
| 1.3 镉与氧化应激 | 第14-15页 |
| 1.4 钙连蛋白(CNX)/钙网蛋白(CRT) | 第15-16页 |
| 1.5 镉与钙的相互作用 | 第16-18页 |
| 1.5.1 镉与钙的理化特性 | 第16页 |
| 1.5.2 钙通道在镉转运中的作用 | 第16-17页 |
| 1.5.3 镉与钙的结合受体 | 第17页 |
| 1.5.4 镉对钙调控的影响 | 第17-18页 |
| 1.6 研究的目的与意义 | 第18-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-26页 |
| 2.1 试验材料与方法 | 第19-20页 |
| 2.1.1 主要仪器 | 第19页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第19-20页 |
| 2.2 鸡CNX和CRT多克隆抗体的制备 | 第20-21页 |
| 2.2.1 鸡CNX和CRT重组表达质粒构建 | 第20-21页 |
| 2.2.2 鸡CNX和CRT重组蛋白表达 | 第21页 |
| 2.2.3 鸡CNX和CRT多克隆抗体的制备 | 第21页 |
| 2.3 LMH的培养 | 第21-22页 |
| 2.3.1 LMH细胞的培养方法 | 第21-22页 |
| 2.3.2 LMH细胞增殖生长曲线的测定方法 | 第22页 |
| 2.4 实验设计方案 | 第22页 |
| 2.5 细胞毒性的测定 | 第22-23页 |
| 2.5.1 硒、镉致LMH细胞半数抑制浓度（IC50）的测定 | 第22-23页 |
| 2.5.2 细胞形态学观察 | 第23页 |
| 2.5.3 细胞LDH活性的测定 | 第23页 |
| 2.6 内质网应激的测定 | 第23-24页 |
| 2.6.1 总RNA提取与反转录 | 第23页 |
| 2.6.2 内质网应激标志分子的引物设计 | 第23-24页 |
| 2.6.3 内质网应激标志分子表达的测定 | 第24页 |
| 2.7 细胞自噬的测定 | 第24-25页 |
| 2.7.1 细胞自噬泡的观察 | 第24页 |
| 2.7.2 细胞自噬标志基因表达测定 | 第24-25页 |
| 2.8 细胞内钙稳态的测定 | 第25页 |
| 2.8.1 细胞内游离钙离子含量的测定 | 第25页 |
| 2.8.2 细胞钙稳态调控相关基因表达的测定 | 第25页 |
| 2.9 内质网钙稳态调控蛋白CNX与CRT表达水平的测定 | 第25页 |
| 2.10 数据统计与分析 | 第25-26页 |
| 3 结果 | 第26-46页 |
| 3.1 鸡CNX和CRT多克隆抗体的制备 | 第26-29页 |
| 3.1.1 鸡肝脏组织中总RNA的提取与鉴定 | 第26页 |
| 3.1.2 鸡CNX和CRT基因扩增结果 | 第26页 |
| 3.1.3 鸡CNX和CRT基因序列的测序结果 | 第26页 |
| 3.1.4 鸡CNX和CRT重组表达质粒的构建 | 第26-27页 |
| 3.1.5 融合蛋白的表达、鉴定与纯化 | 第27-28页 |
| 3.1.6 多克隆抗体的制备与鉴定 | 第28-29页 |
| 3.2 LMH细胞的培养与增殖 | 第29-30页 |
| 3.2.1 LMH细胞的培养 | 第29-30页 |
| 3.2.2 LMH细胞的增殖生长曲线 | 第30页 |
| 3.3 硒拮抗镉致LMH细胞毒性最佳剂量的确定 | 第30-32页 |
| 3.3.1 硒、镉致LMH细胞半数抑制浓度（IC50） | 第30-31页 |
| 3.3.2 硒与镉对LMH细胞形态影响的检测结果 | 第31页 |
| 3.3.3 硒与镉对LMH细胞LDH活性影响的检测结果 | 第31-32页 |
| 3.4 硒拮抗镉致LMH细胞内质网应激效应的检测结果 | 第32-33页 |
| 3.5 硒拮抗镉致LMH细胞自噬效应的检测结果 | 第33-35页 |
| 3.5.1 硒与镉对LMH细胞自噬泡影响的检测结果 | 第33-34页 |
| 3.5.2 硒与镉对LMH细胞自噬标志基因表达影响的检测结果 | 第34-35页 |
| 3.6 硒拮抗镉致LMH细胞钙稳态改变的检测结果 | 第35-37页 |
| 3.6.1 硒与镉对LMH细胞内游离钙离子含量影响的检测结果 | 第35页 |
| 3.6.2 硒与镉对LMH细胞内钙调控相关基因表达影响的检测结果 | 第35-36页 |
| 3.6.3 硒与镉对LMH细胞内CNX与CRT表达影响的检测结果 | 第36-37页 |
| 3.7 钙稳态在硒拮抗镉致LMH细胞内质网应激的作用 | 第37-46页 |
| 3.7.1 2-APB对硒与镉处理LMH细胞活性影响的检测结果 | 第37-39页 |
| 3.7.2 2-APB对硒与镉处理LMH细胞内质网应激影响的检测结果 | 第39-40页 |
| 3.7.3 2-APB对硒与镉处理LMH细胞自噬影响的检测结果 | 第40-42页 |
| 3.7.4 2-APB对硒与镉处理LMH细胞钙稳态影响的检测结果 | 第42-46页 |
| 4 讨论 | 第46-52页 |
| 4.1 鸡CNX和CRT多克隆抗体的制备 | 第46页 |
| 4.2 硒拮抗镉致LMH细胞毒性的效应 | 第46-47页 |
| 4.3 硒拮抗镉致LMH细胞内质网应激的效应 | 第47-48页 |
| 4.4 硒拮抗镉致LMH细胞自噬的效应 | 第48-49页 |
| 4.4.1 硒与镉对LMH细胞自噬泡的影响 | 第48页 |
| 4.4.2 硒与镉对LMH细胞自噬标志基因表达的影响 | 第48-49页 |
| 4.5 硒拮抗镉致LMH细胞钙稳态失衡的效应 | 第49-50页 |
| 4.5.1 硒与镉对LMH细胞内游离钙离子含量的影响 | 第49-50页 |
| 4.5.2 硒与镉对LMH细胞内钙稳态调控相关基因表达的影响 | 第50页 |
| 4.5.3 硒与镉对LMH细胞内CNX与CRT表达的影响 | 第50页 |
| 4.6 2-APB在硒拮抗镉致LMH细胞内质网应激的效应 | 第50-52页 |
| 5 结论 | 第52-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-63页 |
| 附录 | 第63-64页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第64页 |
