| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8页 |
| 引言 | 第9-16页 |
| 1 眼蕈蚊生物学习性及危害 | 第9-10页 |
| 2 眼蕈蚊防治现状 | 第10-12页 |
| 2.1 农业防治 | 第10页 |
| 2.2 物理防治 | 第10-11页 |
| 2.3 化学防治 | 第11页 |
| 2.4 生物防治 | 第11-12页 |
| 3 眼蕈蚊的饲养 | 第12页 |
| 4 Bt杀蚊研究概况 | 第12-15页 |
| 4.1 Bt的研究概况 | 第12页 |
| 4.2 ICPs分类及杀虫机理 | 第12-15页 |
| 4.2.1 Cry和Cyt对蚊虫的作用机制 | 第13-14页 |
| 4.2.2 研究受体的技术手段 | 第14-15页 |
| 5 本研究的目的和意义 | 第15-16页 |
| 1 厉眼蕈蚊的简易饲养及环境对蕈蚊生长发育的影响 | 第16-17页 |
| 1.1 材料 | 第16页 |
| 1.1.1 供试虫源 | 第16页 |
| 1.1.2 饲料 | 第16页 |
| 1.1.3 养虫笼 | 第16页 |
| 1.1.4 养虫盒 | 第16页 |
| 1.1.5 成虫收集 | 第16页 |
| 1.1.6 虫卵收集 | 第16页 |
| 1.2 温度和湿度梯度设置 | 第16-17页 |
| 2 LLP29 cry4B基因的克隆和表达 | 第17-27页 |
| 2.1 材料 | 第17页 |
| 2.1.1 蕈蚊与供试菌株 | 第17页 |
| 2.1.2 试剂与耗材 | 第17页 |
| 2.2 试验方法 | 第17-27页 |
| 2.2.1 Bt总DNA的提取 | 第17-18页 |
| 2.2.2 cry4B基因的克隆 | 第18-22页 |
| 2.2.2.1 引物设计 | 第18页 |
| 2.2.2.2 Pfu高保真酶PCR扩增 | 第18-19页 |
| 2.2.2.3 琼脂糖凝胶上DNA片段的回收 | 第19页 |
| 2.2.2.4 PCR扩增产物添加A尾 | 第19-20页 |
| 2.2.2.5 大肠杆菌JM109感受态细胞的制备 | 第20页 |
| 2.2.2.6 cry4B基因的克隆 | 第20-21页 |
| 2.2.2.7 重组质粒的酶切验证 | 第21-22页 |
| 2.2.2.8 测序 | 第22页 |
| 2.2.2.9 cry4B基因的生物信息学分析 | 第22页 |
| 2.2.3 cry4B基因的原核表达 | 第22-25页 |
| 2.2.3.1 质粒的双酶切 | 第23页 |
| 2.2.3.2 重组表达载体的构建 | 第23-24页 |
| 2.2.3.3 重组质粒的酶切验证 | 第24页 |
| 2.2.3.4 蛋白表达和纯化 | 第24-25页 |
| 2.2.3.4.1 IPTG诱导重组蛋白的表达 | 第24页 |
| 2.2.3.4.2 制备细胞裂解液 | 第24-25页 |
| 2.2.3.4.3 Sepharose 4B的预处理 | 第25页 |
| 2.2.3.4.4 Batch纯化重组融合蛋白 | 第25页 |
| 2.2.3.4.5 介质的清洗 | 第25页 |
| 2.2.4 Bradford法测定蛋白浓度 | 第25-26页 |
| 2.2.5 SDS-PAGE | 第26页 |
| 2.2.6 生物测定 | 第26-27页 |
| 3 Cry4B与蕈蚊中肠受体Pulls down试验 | 第27-30页 |
| 3.1 材料 | 第27页 |
| 3.1.1 蕈蚊 | 第27页 |
| 3.1.2 试剂与耗材 | 第27页 |
| 3.1.3 主要缓冲液 | 第27页 |
| 3.2 蕈蚊中肠刷状缘膜蛋白(BBMV)的提取 | 第27-28页 |
| 3.3 BBMV结合蛋白的分离与鉴定 | 第28页 |
| 3.3.1 Cry4B蛋白的生物素标记 | 第28页 |
| 3.3.2 葡聚糖凝胶色谱分离活性蛋白片段 | 第28页 |
| 3.3.2.1 葡聚糖凝胶的试验前处理 | 第28页 |
| 3.3.2.2 装柱与平衡 | 第28页 |
| 3.3.2.3 样品的添加与洗脱 | 第28页 |
| 3.4 结合蛋白的Pulls down试验 | 第28-29页 |
| 3.5 蛋白质的质谱检测 | 第29-30页 |
| 4 结果与分析 | 第30-44页 |
| 4.1 眼蕈蚊的最佳饲养条件 | 第30-32页 |
| 4.2 cry4B基因的克隆 | 第32-34页 |
| 4.3 生物信息学分析 | 第34-39页 |
| 4.3.1 序列同源性分析 | 第34-36页 |
| 4.3.2 cry4B基因的基本理化性质 | 第36-37页 |
| 4.3.3 cry4B基因编码蛋白的结构预测 | 第37-38页 |
| 4.3.4 cry4B基因的系统发育分析 | 第38-39页 |
| 4.4 cry4B的原核表达 | 第39-41页 |
| 4.4.1 表达载体的构建 | 第39-40页 |
| 4.4.2 IPTG诱导Cry4B的表达 | 第40-41页 |
| 4.5 生物测定 | 第41-42页 |
| 4.6 结合蛋白的Pulls down分离试验 | 第42-43页 |
| 4.7 质谱检测 | 第43-44页 |
| 小结与讨论 | 第44-46页 |
| 参考文献 | 第46-50页 |
| 致谢 | 第50页 |
