| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 上篇 文献综述 | 第11-26页 |
| 1 溶杆菌的分类及鉴定 | 第12页 |
| 2 产酶溶杆菌的生物学特性 | 第12-20页 |
| 2.1 胞外水解酶 | 第14-16页 |
| 2.2 次级代谢产物 | 第16-20页 |
| 3 产酶溶杆菌调控机理方面的研究进展 | 第20-22页 |
| 3.1 产酶溶杆菌中ctp的功能 | 第20-21页 |
| 3.2 产酶溶杆菌中cel的功能 | 第21页 |
| 3.3 产酶溶杆菌中tatC的功能 | 第21页 |
| 3.4 产酶溶杆菌中rpfG的功能 | 第21页 |
| 3.5 产酶溶杆菌中rpfF的功能 | 第21页 |
| 3.6 产酶溶杆菌中lenB2的功能 | 第21-22页 |
| 3.7 产酶溶杆菌中lesR的功能 | 第22页 |
| 3.8 产酶溶杆菌中物的功能 | 第22页 |
| 4 全局性调控因子CLP的功能研究 | 第22-23页 |
| 4.1 Clp的研究概述 | 第22-23页 |
| 4.2 产酶溶杆菌中Clp的研究进展 | 第23页 |
| 5 转录因子的研究方法 | 第23-24页 |
| 6 本文的研究目的及意义 | 第24-26页 |
| 下篇 研究内容 | 第26-89页 |
| 第一章 产酶溶杆菌全局性调控因子LeClp的蛋白表达与功能分析 | 第27-41页 |
| 1 材料与方法 | 第29-35页 |
| 1.1 材料 | 第29页 |
| 1.2 方法 | 第29-35页 |
| 2 结果与分析 | 第35-38页 |
| 2.1 LeClp蛋白原核表达载体的验证 | 第35-36页 |
| 2.2 LeClp蛋白的原核表达诱导 | 第36-37页 |
| 2.3 LeClp蛋白的定量和Western杂交验证 | 第37-38页 |
| 2.4 MST检测LeClp与c-di-GMP结合 | 第38页 |
| 3 讨论 | 第38-41页 |
| 第二章 全局性调控因子LECLP调控几丁质酶生物合成的机制研究 | 第41-59页 |
| 1 材料与方法 | 第42-48页 |
| 1.1 材料 | 第42-43页 |
| 1.2 方法 | 第43-48页 |
| 2 结果与分析 | 第48-58页 |
| 2.1 chiA互补菌株构建以及几丁质酶活性检测 | 第48页 |
| 2.2 Leclp位于chiA上游,并调控几丁质酶的生物合成 | 第48-49页 |
| 2.3 生物信息学分析猜测LeClp通过直接结合在chiA的启动子区来调控几丁质酶的生物活性 | 第49-50页 |
| 2.4 体外实验证明LeClp通过直接结合在chiA的启动子区来调控几丁质酶的生物活性 | 第50-53页 |
| 2.5 体内实验证明LeClp通过直接结合在chiA的启动子区来调控几丁质酶的生物活性 | 第53-56页 |
| 2.6 c-di-GMP的添加并未影响LeClp与chiA基因的启动子区的结合 | 第56-57页 |
| 2.7 推测LeClp与chiA基因的启动子区的结合在产酶溶杆菌中是保守的 | 第57-58页 |
| 3 讨论 | 第58-59页 |
| 第三章 全局性调控因子LECLP调控次级代谢产物HSAF生物合成的机制研究 | 第59-77页 |
| 1 材料与方法 | 第60-65页 |
| 1.1 材料 | 第60-61页 |
| 1.2 方法 | 第61-65页 |
| 2 结果与分析 | 第65-74页 |
| 2.1 生物信息学分析猜测LeClp通过直接结合在pks/nrps基因的启动子区来调控HSAF的生物合成 | 第65-66页 |
| 2.2 体外实验证明LeClp通过直接结合在pks/nrps基因的启动子区来调控HSAF的生物合成 | 第66-68页 |
| 2.3 c-di-GMP的添加并未影响LeClp与pks/nrps基因的启动子区的结合 | 第68-69页 |
| 2.4 HTH结构域双过表达菌株的构建与验证 | 第69-71页 |
| 2.5 LesR中HTH结构域通过调控Leclp来调控HSAF的合成 | 第71-72页 |
| 2.6 Western实验揭示LeClp在蛋白水平受到LesR的调控 | 第72-73页 |
| 2.7 RNA-Seq结果揭示Leclp和lesR在基因调控方面的协同作用 | 第73-74页 |
| 3 讨论 | 第74-77页 |
| 第四章 全局性调控因子LECLP调控次级代谢产物WAP-8294A2生物合成的机制研究 | 第77-89页 |
| 1 材料与方法 | 第78-81页 |
| 1.1 材料 | 第78-79页 |
| 1.2 方法 | 第79-81页 |
| 2 结果与分析 | 第81-87页 |
| 2.1 WAP-8294A2生物合成基因簇启动子分析 | 第81-82页 |
| 2.2 细菌单杂交实验证明LeClp无法直接结合在WAP-8294A2合成基因簇的启动子区来调控WAP-8294A2的生物合成 | 第82页 |
| 2.3 ChIP-Seq方法寻找LeClp直接结合的因子 | 第82-84页 |
| 2.4 ChIP-Seq数据的验证 | 第84页 |
| 2.5 LeClp通过直接结合在OH11-1052启动子区来调控WAP-8294A2的生物合成 | 第84-86页 |
| 2.6 c-di-GMP的添加并未影响LeClp与OH11-1052基因的启动子区的结合 | 第86-87页 |
| 3 讨论 | 第87-89页 |
| 参考文献 | 第89-97页 |
| 全文总结 | 第97-99页 |
| 本论文创新点 | 第99-101页 |
| 附录一 | 第101-107页 |
| 附录二 | 第107-113页 |
| 1 培养基配制 | 第107-108页 |
| 2 试剂及溶液配制 | 第108-113页 |
| 致谢 | 第113-115页 |
| 攻读博士期间发表的论文 | 第115页 |
