| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-36页 |
| 1 两种水稻黑条矮缩病毒病的概述 | 第12-19页 |
| 1.1 水稻黑条矮缩病毒病 | 第12-15页 |
| 1.1.1 水稻黑条矮缩病毒病的发生与危害 | 第12-13页 |
| 1.1.2 水稻黑条矮缩病毒病的发病症状及传播媒介 | 第13-15页 |
| 1.2 南方水稻黑条矮缩病毒病 | 第15-19页 |
| 1.2.1 南方水稻黑条矮缩病毒的发现 | 第15-16页 |
| 1.2.2 南方水稻黑条矮缩病毒病的发生与危害 | 第16页 |
| 1.2.3 南方水稻黑条矮缩病毒病的发病症状及传播媒介 | 第16-19页 |
| 2 两种水稻黑条矮缩病毒的分子生物学特性 | 第19-28页 |
| 2.1 水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)的基因组及其所编码的蛋白 | 第19-24页 |
| 2.1.1 RBSDV病毒粒体 | 第19页 |
| 2.1.2 RBSDV的基因组结构 | 第19-21页 |
| 2.1.3 RBSDV编码的蛋白及其生物学功能 | 第21-23页 |
| 2.1.4 RBSDV病毒蛋白的互作研究 | 第23-24页 |
| 2.2 南方水稻黑条矮缩病毒(SRBSDV)的基因组及其所编码的蛋白 | 第24-28页 |
| 2.2.1 SRBSDV病毒粒体 | 第24-25页 |
| 2.2.2 SRBSDV的基因组结构 | 第25-26页 |
| 2.2.3 SRBSDV编码的蛋白及其生物学功能 | 第26-28页 |
| 2.2.4 SRBSDV病毒蛋白的互作研究 | 第28页 |
| 3 呼肠孤病毒的复制 | 第28-36页 |
| 3.1 呼肠孤病毒的侵染与复制 | 第28-30页 |
| 3.2 呼肠孤病毒的复制场所 | 第30-33页 |
| 3.2.1 呼肠孤病毒的病毒质(包涵体)结构 | 第31-32页 |
| 3.2.2 病毒质蛋白形成病毒质(包涵体)的特点 | 第32页 |
| 3.2.3 病毒质蛋白的生物学特性 | 第32-33页 |
| 3.3 斐济病毒属病毒质及病毒质蛋白的研究进展 | 第33-36页 |
| 第二章 RBSDV病毒质蛋白P9-1结合单链RNA的结构与生化特性研究 | 第36-70页 |
| 1 材料 | 第36-37页 |
| 2 试验方法 | 第37-49页 |
| 2.1 表达载体及体外转录载体的构建 | 第37-42页 |
| 2.1.1 PCR扩增片段 | 第37-38页 |
| 2.1.2 割胶回收 | 第38页 |
| 2.1.3 酶切 | 第38-39页 |
| 2.1.4 连接 | 第39-40页 |
| 2.1.5 感受态细胞DH5α制备及转化 | 第40页 |
| 2.1.6 菌落PCR筛选阳性克隆 | 第40-41页 |
| 2.1.7 质粒小提 | 第41-42页 |
| 2.1.8 测序 | 第42页 |
| 2.1.9 序列分析 | 第42页 |
| 2.2 蛋白原核表达 | 第42-47页 |
| 2.2.1 感受态细胞Rosstta(DE3)制备及转化 | 第42页 |
| 2.2.2 原核表达 | 第42-44页 |
| 2.2.3 烟草蚀纹病毒(TEV)切割蛋白 | 第44页 |
| 2.2.4 蛋白透析 | 第44页 |
| 2.2.5 蛋白浓度定量 | 第44-45页 |
| 2.2.6 SDS-PAGE | 第45页 |
| 2.2.7 Western Blot | 第45-46页 |
| 2.2.8 非变性蛋白胶(Blue Native PAGE) | 第46页 |
| 2.2.9 分子筛层析法(Size Exclusion Chromatography, SEC) | 第46-47页 |
| 2.3 体外转录 | 第47-48页 |
| 2.3.1 RNA体外转录 | 第47-48页 |
| 2.3.2 RNA纯化回收 | 第48页 |
| 2.4 凝胶阻滞实验 | 第48-49页 |
| 3 结果与分析 | 第49-66页 |
| 3.1 RBSDV P9-1蛋白体外表达纯化及结合单链RNA特性鉴定 | 第49-50页 |
| 3.2 RBSDV P9-1蛋白优先结合单链核酸但不具有结合特异性 | 第50-51页 |
| 3.3 RBSDV P9-1蛋白与单链RNA结合形成不同迁移大小的核酸蛋白复合体 | 第51-53页 |
| 3.4 RBSDV P9-1蛋白形成一系列多聚体状态 | 第53-55页 |
| 3.5 RBSDV P9-1蛋白优先以八体结构结合单链RNA | 第55-57页 |
| 3.6 RBSDV P9-1 C端手臂缺失突变体不再形成八体并且影响对单链RNA的结合 | 第57-60页 |
| 3.7 RBSDVP9-1结合RNA的重要结构域及在P9-1三维晶体结构中的定位 | 第60-63页 |
| 3.8 RBSDVP9-1重要结构域中带正电荷氨基酸对结合RNA具有关键作用 | 第63-66页 |
| 4 讨论 | 第66-70页 |
| 第三章 SRBSDV病毒质蛋白P9-1结合单链RNA的结构与生化特性研究 | 第70-84页 |
| 1 材料 | 第70页 |
| 2 试验方法 | 第70-71页 |
| 2.1 载体构建 | 第71页 |
| 3 结果与分析 | 第71-80页 |
| 3.1 SRBSDV P9-1蛋白形成多种多聚体蛋白类型 | 第71-72页 |
| 3.2 SRBSDV P9-1蛋白具有单链RNA结合活性 | 第72-73页 |
| 3.3 SRBSDV P9-1蛋白优先以高聚体蛋白形式结合单链RNA | 第73-75页 |
| 3.4 SRBSDV P9-1蛋白C端手臂对该蛋白形成多体类型及结合单链RNA能力的影响 | 第75-78页 |
| 3.5 SRBSDV P9-1 N端带正电荷氨基酸是重要的RNA结合位点 | 第78页 |
| 3.6 SRBSDV P9-1蛋白131-160位氨基酸残基序列对RBSDV P9-1蛋白结合单链RNA能力的影响 | 第78-80页 |
| 4 讨论 | 第80-84页 |
| 第四章 全文总结 | 第84-86页 |
| 1 全文总结 | 第84-85页 |
| 1.1 RBSDV病毒质蛋白P9-1结合单链RNA的结构与生化特性研究 | 第84页 |
| 1.2 SRBSDV病毒质蛋白P9-1结合单链RNA的结构与生化特性研究 | 第84-85页 |
| 2 本研究创新点 | 第85-86页 |
| 参考文献 | 第86-94页 |
| 附录A 番茄斑萎病毒侵染性克隆的相关研究 | 第94-110页 |
| 附录B 本论文主要的重要缩写词及中文对照 | 第110-112页 |
| 附录C 本研究所用的引物 | 第112-116页 |
| 附录D 本研究所用溶液、缓冲液及培养基配方 | 第116-122页 |
| 附录E 研究生期间发表的学术论文 | 第122-124页 |
| 致谢 | 第124页 |
