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过量表达OsiICK4对水稻种子发育及植株生长的影响

致谢第1-7页
摘要第7-9页
Abstract第9-13页
1. 前言第13-32页
   ·细胞周期第13-14页
   ·细胞周期调控机制及主要的调控因子第14-25页
     ·细胞周期蛋白(cyclins)第15-17页
     ·细胞周期蛋白依赖激酶(cyclin-dependent kinases,CDKs)第17-19页
     ·细胞周期蛋白依赖激酶抑制基因(inhibtors of cyclin-dependent kinases,ICKs)第19-20页
     ·其他细胞周期蛋白调控因子第20-22页
     ·细胞周期的转换第22-25页
   ·拟南芥ICKs研究进展第25-26页
   ·水稻ICKs的研究进展第26-27页
   ·酵母双杂交技术第27-29页
   ·亚细胞定位技术第29-30页
   ·本研究的目的和意义第30-32页
2. 材料与方法第32-44页
   ·实验材料第32-33页
     ·水稻材料第32页
     ·质粒载体与菌株第32页
     ·培养基第32页
     ·酶、试剂盒、PCR引物、药品及仪器第32-33页
   ·实验方法第33-44页
     ·植物基因组DNA、RNA提取第33-34页
       ·植物基因组DNA第33-34页
       ·植物总RNA的提取第34页
     ·目的基因的分离及中间载体的构建第34-38页
       ·反转录合成cDNA第一链第34-35页
       ·PCR扩增目的基因第35-36页
       ·目的基因回收及纯化第36页
       ·中间载体的构建第36-38页
       ·启动子及终止子的连接第38页
     ·OsiICK4基因过表达载体构建第38页
     ·亚细胞定位第38页
     ·酵母双杂交分析第38-40页
     ·水稻遗传转化第40-42页
       ·农杆菌EHA105感受态细胞制备第40页
       ·表达载体转化到农杆菌EHA105第40页
       ·愈伤的诱导第40-41页
       ·单克隆农杆菌的准备第41页
       ·农杆菌介导的水稻转化第41-42页
     ·植株再生与初步鉴定第42页
     ·半定量RT-PCR分析第42页
     ·株高、叶形及石蜡切片观察第42-43页
       ·材料固定第42页
       ·材料脱水、透明、浸蜡与包埋第42-43页
       ·切片第43页
       ·染色观察第43页
     ·产量性状观察第43页
     ·花粉活性观察第43-44页
3. 结果与分析第44-55页
   ·OsiICK4基因的特征表述第44-47页
     ·OsiICK4基因的分离第44页
     ·OsiICK4基因的核苷酸序列及氨基酸序列分析第44-46页
     ·亚细胞定位第46页
     ·OsiICK4与CDKs、cyclins的互作分析第46-47页
   ·OsiICK4基因过量表达对水稻植株形态及种子发育的影响第47-55页
     ·推定的转基因植株的获得第47页
     ·转基因植株的鉴定及半定量RT-PCR分析第47-48页
     ·OsiICK4基因过量表达影响植株茎的生长第48-50页
     ·OsiICK4基因过量表达导致植株叶片反卷第50-52页
     ·OsiICK4基因过量表达对水稻产量的影响第52-53页
     ·OsiICK4基因过量表达影响花粉的完整性和活性第53-55页
4. 讨论第55-60页
参考文献第60-66页
作者简历第66-67页
附录 主要培养基及试剂配方第67-69页

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