NS3蛋白对乙型脑炎病毒增殖的影响及其宿主互作蛋白的筛选
| 摘要 | 第4-7页 |
| ABSTRACT | 第7-10页 |
| 缩略词表 | 第11-16页 |
| 第一部分 文献综述 | 第16-31页 |
| 1 乙型脑炎病毒概述 | 第16-18页 |
| 1.1 JEV基因组结构 | 第16-17页 |
| 1.2 JEV蛋白结构 | 第17-18页 |
| 1.3 JEV培养特性 | 第18页 |
| 2 JEV感染细胞的机制 | 第18页 |
| 3 JEV非结构蛋白NS3结构与功能 | 第18-23页 |
| 3.1 NS3的丝氨酸蛋白酶结构域 | 第19页 |
| 3.2 NS3的核苷三磷酸/解旋酶结构域 | 第19-21页 |
| 3.3 NS3蛋白的辅助因子 | 第21-22页 |
| 3.4 NS3蛋白致细胞凋亡与致癌作用 | 第22-23页 |
| 3.5 NS3蛋白的抗原性 | 第23页 |
| 4 NS3蛋白与细胞自噬 | 第23页 |
| 5 NS3蛋白与病毒增殖 | 第23-24页 |
| 6 黄病毒宿主细胞互作蛋白研究 | 第24-26页 |
| 6.1 细胞表面受体 | 第24-25页 |
| 6.2 热激蛋白 | 第25页 |
| 6.3 其他宿主细胞互作蛋白 | 第25-26页 |
| 7 蛋白互作研究方法进展 | 第26-31页 |
| 7.1 酵母双杂交系统 | 第26-28页 |
| 7.2 免疫共沉淀技术 | 第28-29页 |
| 7.3 GST-Pull down技术 | 第29页 |
| 7.4 噬菌体展示技术 | 第29页 |
| 7.5 串联亲和纯化技术 | 第29-30页 |
| 7.6 荧光共振能量转移技术 | 第30-31页 |
| 研究目的与意义 | 第31-32页 |
| 第二部分 试验研究 | 第32-93页 |
| 第一章 NS3蛋白对乙型脑炎病毒增殖的影响 | 第32-54页 |
| 1 试验材料 | 第32-33页 |
| 1.1 病毒、细胞系及试验动物 | 第32页 |
| 1.2 主要试剂 | 第32-33页 |
| 1.3 试剂配制 | 第33页 |
| 1.4 主要仪器设备 | 第33页 |
| 2 试验方法 | 第33-40页 |
| 2.1 shRNA表达载体的构建 | 第33-34页 |
| 2.2 质粒提取与转染 | 第34-35页 |
| 2.3 细胞感染JEV | 第35页 |
| 2.4 JEV增殖量的检测 | 第35-39页 |
| 2.5 小鼠体内实验 | 第39-40页 |
| 3 结果与分析 | 第40-50页 |
| 3.1 shRNA表达载体的构建 | 第40-42页 |
| 3.2 shRNA质粒的转染效率 | 第42-43页 |
| 3.3 shRNA质粒的抑制NS3基因表达的效率 | 第43-44页 |
| 3.4 JEV mRNA相对含量测定结果 | 第44-45页 |
| 3.5 BHK21细胞中JEV滴度检测结果 | 第45-46页 |
| 3.6 间接免疫荧光实验结果 | 第46-47页 |
| 3.7 Western blot检测结果 | 第47-48页 |
| 3.8 乳鼠脑内JEV滴度检测结果 | 第48-49页 |
| 3.9 shRNA质粒对小鼠的保护作用 | 第49-50页 |
| 4 讨论 | 第50-53页 |
| 5 小结 | 第53-54页 |
| 第二章 NS3蛋白的宿主细胞互作蛋白的筛选 | 第54-75页 |
| 1 试验材料 | 第54-56页 |
| 1.1 主要试剂 | 第54页 |
| 1.2 试剂配制 | 第54-55页 |
| 1.3 主要仪器设备 | 第55-56页 |
| 2 试验方法 | 第56-63页 |
| 2.1 NS3基因的扩增与TA克隆 | 第56-57页 |
| 2.2 诱饵质粒的构建 | 第57-59页 |
| 2.3 诱饵酵母菌的制备 | 第59-61页 |
| 2.4 双杂交 | 第61-63页 |
| 2.5 回复杂交 | 第63页 |
| 3 结果与分析 | 第63-69页 |
| 3.1 诱饵质粒的构建 | 第63-64页 |
| 3.2 诱饵酵母菌转化 | 第64-65页 |
| 3.3 诱饵酵母菌表型鉴定 | 第65-67页 |
| 3.4 双杂交结果 | 第67-68页 |
| 3.5 回复杂交验证 | 第68-69页 |
| 4 讨论 | 第69-74页 |
| 5 小结 | 第74-75页 |
| 第三章 NS3蛋白与宿主细胞蛋白相互作用的鉴定 | 第75-93页 |
| 1 试验材料 | 第75-76页 |
| 1.1 细胞系 | 第75页 |
| 1.2 主要试剂及配制 | 第75-76页 |
| 1.3 主要仪器设备 | 第76页 |
| 2 试验方法 | 第76-82页 |
| 2.1 NS3基因与互作蛋白基因的扩增 | 第76-78页 |
| 2.2 真核表达质粒的构建 | 第78页 |
| 2.3 NS3蛋白与互作蛋白的真核表达 | 第78-80页 |
| 2.4 免疫共沉淀 | 第80-82页 |
| 3 结果与分析 | 第82-88页 |
| 3.1 真核表达质粒的构建 | 第82-84页 |
| 3.2 NS3蛋白与互作蛋白的真核表达 | 第84-86页 |
| 3.3 免疫共沉淀结果 | 第86-88页 |
| 4 讨论 | 第88-92页 |
| 5 小结 | 第92-93页 |
| 全文结论 | 第93-94页 |
| 论文创新点 | 第94-95页 |
| 参考文献 | 第95-109页 |
| 致谢 | 第109-110页 |
| 附录 | 第110-114页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第114页 |
