| 中文摘要 | 第1-11页 |
| 英文摘要 | 第11-14页 |
| 1 引言 | 第14-28页 |
| ·马立克氏病（MD）的研究进展 | 第14-18页 |
| ·病原学 | 第15页 |
| ·流行病学 | 第15-16页 |
| ·感染机制及病理变化 | 第16-17页 |
| ·早期的生产性—限制性病毒感染 | 第16页 |
| ·病毒的潜伏感染期 | 第16-17页 |
| ·第二次溶细胞感染 | 第17页 |
| ·转化和肿瘤形成 | 第17页 |
| ·临床症状及病理变化 | 第17-18页 |
| ·诊断技术 | 第18页 |
| ·MDV分子生物学的研究进展 | 第18-22页 |
| ·MDV的基因组结构 | 第18-20页 |
| ·MDV的结构蛋白及相关基因 | 第20-22页 |
| ·与致肿瘤相关的基因 | 第21-22页 |
| ·DNA片段克隆的载体系统 | 第22-26页 |
| ·质粒 | 第22-23页 |
| ·粘粒 | 第23页 |
| ·BAC的优势及其发展 | 第23-26页 |
| ·细菌人工染色体载体系统(BAC) | 第23-24页 |
| ·利用BAC构建MDV感染性克隆 | 第24-25页 |
| ·基于MDV BAC感染性克隆的同源重组技术 | 第25-26页 |
| ·MD的防制 | 第26-27页 |
| ·免疫机理 | 第26页 |
| ·目前MDV疫苗的种类 | 第26-27页 |
| ·传统疫苗 | 第26页 |
| ·新型疫苗 | 第26-27页 |
| ·禽流感研究进展 | 第27-28页 |
| ·病毒病原学 | 第27页 |
| ·禽流感的流行病学 | 第27页 |
| ·禽流感的传播方式 | 第27页 |
| ·H5N2亚型禽流感的防制 | 第27-28页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第28页 |
| 2 材料和方法 | 第28-41页 |
| ·主要实验耗材和仪器 | 第28-29页 |
| ·分子克隆相关试剂 | 第28-29页 |
| ·常规细胞培养相关试剂 | 第29页 |
| ·相关菌种和病毒株 | 第29页 |
| ·主要仪器 | 第29页 |
| ·抗H5N2-HA鼠多克隆抗体的制备及H5N2-HA真核表达载体的构建 | 第29-34页 |
| ·H5N2-HA高免血清的制备 | 第29-33页 |
| ·两段HA基因的克隆测序 | 第30-31页 |
| ·HA原核表达载体构建 | 第31-32页 |
| ·目的蛋白的诱导表达 | 第32页 |
| ·抗HA蛋白多克隆抗体的制备及鉴定 | 第32-33页 |
| ·HA真核表达载体的构建 | 第33-34页 |
| ·HA整段ORF的克隆测序 | 第33页 |
| ·pcDNA3.1-HA表达载体的构建 | 第33-34页 |
| ·pcDNA3.1-HA在CEF细胞上的表达 | 第34页 |
| ·一株表达H5N2-HA基因的重组RGX-CMV-HA的构建 | 第34-41页 |
| ·原理 | 第34-36页 |
| ·含有HA表达盒的外源基因与GX0101ΔMeq的重组 | 第36-39页 |
| ·kanr基因和HA基因共表达载体的构建 | 第36-37页 |
| ·外源插入片段 | 第37-38页 |
| ·串联表达盒与GX0101Δmeq之间在EL250中的重组 | 第38-39页 |
| ·利用Flp/FRT重组系统敲出kanr抗性筛选基因 | 第39-40页 |
| ·大量提取重组质粒 | 第40页 |
| ·重组病毒的拯救 | 第40-41页 |
| ·重组病毒的验证 | 第41页 |
| 3 结果与分析 | 第41-47页 |
| ·抗H5N2-HA鼠多价血清的制备及H5N2-HA真核表达载体的构建 | 第41-44页 |
| ·HA基因分两段克隆测序 | 第41-42页 |
| ·HA融合蛋白的诱导表达 | 第42页 |
| ·抗H5N2-HA鼠多克隆抗体的特异性鉴定 | 第42-43页 |
| ·H5N2-HA基因的PCR扩增 | 第43-44页 |
| ·HA真核表达载体在CEF细胞上的验证 | 第44页 |
| ·一株表达H5N2-HA基因的重组RGX-CMV-HA的构建 | 第44-47页 |
| ·PCR扩增和测序与GX0101Δmeq重组的外源插入表达盒 | 第44-45页 |
| ·在EL250中串联表达盒与GX0101Δmeq之间的重组 | 第45-46页 |
| ·敲除抗性筛选基因kanr | 第46-47页 |
| ·IFA验证HA基因在重组rGX-CMV-HA中的表达 | 第47页 |
| 4 讨论 | 第47-48页 |
| 5 结论 | 第48-49页 |
| 6 参考文献 | 第49-60页 |
| 7 致谢 | 第60-61页 |
| 8 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第61页 |
