| 中文摘要 | 第1-10页 |
| 英文摘要 | 第10-12页 |
| 1 引言 | 第12-23页 |
| ·新型鸭呼肠孤病毒发病史及现状 | 第12页 |
| ·病毒病原学特性 | 第12-13页 |
| ·分子生物学特性 | 第13页 |
| ·病毒流行病学特性 | 第13-14页 |
| ·病毒临床症状及病理组织学变化 | 第14-15页 |
| ·临床症状 | 第14页 |
| ·剖检病变 | 第14页 |
| ·细胞与胚体病变 | 第14-15页 |
| ·诊断方法 | 第15-21页 |
| ·PCR检测方法 | 第15-16页 |
| ·PCR技术的基本原理 | 第15-16页 |
| ·逆转录RT-PCR | 第16页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第16-21页 |
| ·实时荧光定量PCR原理 | 第16-17页 |
| ·实时荧光定量PCR重要参数 | 第17页 |
| ·实时荧光定量PCR的定量方法 | 第17-18页 |
| ·实时荧光定量PCR的分类 | 第18-20页 |
| ·RT-LAMP检测方法 | 第20-21页 |
| ·各种检测方法在NDRV检测中的应用 | 第21-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-35页 |
| ·材料 | 第23-25页 |
| ·毒株、菌株与细胞 | 第23页 |
| ·主要器材与试剂 | 第23-24页 |
| ·主要器材 | 第23页 |
| ·主要试剂 | 第23-24页 |
| ·引物的设计与合成 | 第24-25页 |
| ·方法 | 第25-35页 |
| ·新型鸭呼肠孤病毒荧光定量RT-PCR方法的建立 | 第25-30页 |
| ·实时荧光定量RT-PCR标准模板的制备 | 第25-29页 |
| ·病毒基因组DNA/RNA的提取 | 第25页 |
| ·RT-PCR扩增用于体外转录的目的基因片段 | 第25-26页 |
| ·PCR产物胶回收纯化 | 第26-27页 |
| ·CaCl2法制备大肠杆菌感受态细胞 | 第27页 |
| ·胶回收产物的连接与转化 | 第27-28页 |
| ·菌落PCR筛选阳性克隆与鉴定 | 第28页 |
| ·S1基因阳性标准品的制备 | 第28-29页 |
| ·荧光定量RT-PCR标准曲线的建立 | 第29页 |
| ·敏感性试验 | 第29页 |
| ·特异性试验 | 第29页 |
| ·重复性试验 | 第29页 |
| ·人工感染鸭粪便排毒检测 | 第29-30页 |
| ·临床检测验证 | 第30页 |
| ·新型鸭呼肠孤病毒RT-LAMP方法的建立 | 第30-32页 |
| ·病毒增殖与纯化 | 第30页 |
| ·反应条件的优化 | 第30-31页 |
| ·RT-LAMP产物酶切鉴定 | 第31页 |
| ·特异性检测试验 | 第31页 |
| ·敏感性检测试验 | 第31-32页 |
| ·临床应用 | 第32页 |
| ·新型鸭呼肠孤病毒细胞适应性分析 | 第32-35页 |
| ·各种细胞的准备与传代培养 | 第32页 |
| ·新型鸭呼肠孤病毒的接种和增殖 | 第32-33页 |
| ·新型鸭呼肠孤病毒致各种细胞的病变观察 | 第33页 |
| ·新型鸭呼肠孤病毒TCID50的测定 | 第33页 |
| ·新型鸭呼肠孤病毒的回收与纯化 | 第33页 |
| ·新型鸭呼肠孤病毒在各种细胞内增殖的生长曲线的绘制 | 第33-35页 |
| 3 结果与分析 | 第35-48页 |
| ·新型鸭呼肠孤病毒荧光定量RT-PCR方法的建立 | 第35-39页 |
| ·目的基因片段的克隆及阳性质粒的制备 | 第35页 |
| ·最佳反应条件的确定 | 第35页 |
| ·荧光定量RT-PCR标准曲线的建立 | 第35-36页 |
| ·敏感性试验 | 第36-37页 |
| ·特异性试验 | 第37页 |
| ·重复性试验 | 第37-38页 |
| ·人工感染鸭粪便排毒检测 | 第38页 |
| ·临床样本检测 | 第38-39页 |
| ·新型鸭呼肠孤病毒RT-LAMP方法的建立 | 第39-43页 |
| ·RT-LAMP反应体系与条件优化 | 第39-40页 |
| ·RT-LAMP产物酶切鉴定 | 第40页 |
| ·特异性检测试验 | 第40-41页 |
| ·敏感性检测试验 | 第41-42页 |
| ·临床应用 | 第42-43页 |
| ·新型鸭呼肠孤病毒在细胞上的适应性分析 | 第43-48页 |
| ·新型鸭呼肠孤病毒在各种细胞上的病变观察 | 第43-44页 |
| ·新型鸭呼肠孤病毒TCID50的测定 | 第44-45页 |
| ·新型鸭呼肠孤病毒的回收与纯化 | 第45页 |
| ·新型鸭呼肠孤病毒在各种细胞内增殖的生长曲线的绘制 | 第45-48页 |
| 4 讨论 | 第48-51页 |
| ·NDRV荧光定量RT-PCR检测方法的建立 | 第48-49页 |
| ·NDRV RT-LAMP检测方法的建立 | 第49-50页 |
| ·NDRV细胞适应性分析 | 第50-51页 |
| 5 结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第58页 |