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新型鸭呼肠孤病毒检测方法及细胞适应性的研究

中文摘要第1-10页
英文摘要第10-12页
1 引言第12-23页
   ·新型鸭呼肠孤病毒发病史及现状第12页
   ·病毒病原学特性第12-13页
   ·分子生物学特性第13页
   ·病毒流行病学特性第13-14页
   ·病毒临床症状及病理组织学变化第14-15页
     ·临床症状第14页
     ·剖检病变第14页
     ·细胞与胚体病变第14-15页
   ·诊断方法第15-21页
     ·PCR检测方法第15-16页
       ·PCR技术的基本原理第15-16页
       ·逆转录RT-PCR第16页
     ·实时荧光定量PCR第16-21页
       ·实时荧光定量PCR原理第16-17页
       ·实时荧光定量PCR重要参数第17页
       ·实时荧光定量PCR的定量方法第17-18页
       ·实时荧光定量PCR的分类第18-20页
       ·RT-LAMP检测方法第20-21页
   ·各种检测方法在NDRV检测中的应用第21-23页
2 材料与方法第23-35页
   ·材料第23-25页
     ·毒株、菌株与细胞第23页
     ·主要器材与试剂第23-24页
       ·主要器材第23页
       ·主要试剂第23-24页
     ·引物的设计与合成第24-25页
   ·方法第25-35页
     ·新型鸭呼肠孤病毒荧光定量RT-PCR方法的建立第25-30页
       ·实时荧光定量RT-PCR标准模板的制备第25-29页
         ·病毒基因组DNA/RNA的提取第25页
         ·RT-PCR扩增用于体外转录的目的基因片段第25-26页
         ·PCR产物胶回收纯化第26-27页
         ·CaCl2法制备大肠杆菌感受态细胞第27页
         ·胶回收产物的连接与转化第27-28页
         ·菌落PCR筛选阳性克隆与鉴定第28页
         ·S1基因阳性标准品的制备第28-29页
       ·荧光定量RT-PCR标准曲线的建立第29页
       ·敏感性试验第29页
       ·特异性试验第29页
       ·重复性试验第29页
       ·人工感染鸭粪便排毒检测第29-30页
       ·临床检测验证第30页
     ·新型鸭呼肠孤病毒RT-LAMP方法的建立第30-32页
       ·病毒增殖与纯化第30页
       ·反应条件的优化第30-31页
       ·RT-LAMP产物酶切鉴定第31页
       ·特异性检测试验第31页
       ·敏感性检测试验第31-32页
       ·临床应用第32页
     ·新型鸭呼肠孤病毒细胞适应性分析第32-35页
       ·各种细胞的准备与传代培养第32页
       ·新型鸭呼肠孤病毒的接种和增殖第32-33页
       ·新型鸭呼肠孤病毒致各种细胞的病变观察第33页
       ·新型鸭呼肠孤病毒TCID50的测定第33页
       ·新型鸭呼肠孤病毒的回收与纯化第33页
       ·新型鸭呼肠孤病毒在各种细胞内增殖的生长曲线的绘制第33-35页
3 结果与分析第35-48页
   ·新型鸭呼肠孤病毒荧光定量RT-PCR方法的建立第35-39页
     ·目的基因片段的克隆及阳性质粒的制备第35页
     ·最佳反应条件的确定第35页
     ·荧光定量RT-PCR标准曲线的建立第35-36页
     ·敏感性试验第36-37页
     ·特异性试验第37页
     ·重复性试验第37-38页
     ·人工感染鸭粪便排毒检测第38页
     ·临床样本检测第38-39页
   ·新型鸭呼肠孤病毒RT-LAMP方法的建立第39-43页
     ·RT-LAMP反应体系与条件优化第39-40页
     ·RT-LAMP产物酶切鉴定第40页
     ·特异性检测试验第40-41页
     ·敏感性检测试验第41-42页
     ·临床应用第42-43页
   ·新型鸭呼肠孤病毒在细胞上的适应性分析第43-48页
     ·新型鸭呼肠孤病毒在各种细胞上的病变观察第43-44页
     ·新型鸭呼肠孤病毒TCID50的测定第44-45页
     ·新型鸭呼肠孤病毒的回收与纯化第45页
     ·新型鸭呼肠孤病毒在各种细胞内增殖的生长曲线的绘制第45-48页
4 讨论第48-51页
   ·NDRV荧光定量RT-PCR检测方法的建立第48-49页
   ·NDRV RT-LAMP检测方法的建立第49-50页
   ·NDRV细胞适应性分析第50-51页
5 结论第51-52页
参考文献第52-57页
致谢第57-58页
攻读学位期间发表论文情况第58页

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