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TNFα影响有机阴离子转运多肽1A2表达水平的分子机理研究

摘要第1-4页
Abstract第4-6页
缩略词及英汉对照第6-9页
1.前言第9-15页
   ·有机阴离子转运多肽(OATP)第9-10页
     ·概述和分类第9-10页
     ·OATP的结构第10页
   ·有机阴离子转运多肽 1A2(OATP1A2)第10-12页
     ·OATP1A2概述第10-11页
     ·OATP1A2对药物转运的作用第11页
     ·细胞因子对OATP表达影响的研究概述第11-12页
   ·TNFα 以及NFκB信号通路第12-14页
   ·研究目的和意义第14-15页
2.材料与方法第15-35页
   ·主要仪器设备第15页
   ·材料第15-17页
     ·细胞株第15页
     ·菌株与表达载体第15-16页
     ·基因克隆引物第16-17页
   ·常用试剂第17页
   ·实验方法第17-35页
     ·主要溶液配方和培养基的配制第17-18页
     ·Western blot相关试剂的配制第18-21页
     ·荧光素酶报告基因表达载体的构建第21-24页
     ·定点突变第24-26页
     ·哺乳动物细胞培养第26-28页
     ·SDS-PAGE-免疫印迹第28-29页
     ·omegaPCR方法第29-30页
     ·双荧光素酶报告基因检测第30-31页
     ·染色质免疫沉淀技术第31-34页
     ·统计学分析方法第34-35页
3.结果与分析第35-47页
   ·NFκB结合DNA共有序列的确定与SLCO1A2启动子中的NFκB靶位点的预测第35-38页
   ·双荧光素酶报告基因表达载体的构建第38-41页
     ·提取人乳腺癌细胞MCF7基因组DNA第38-39页
     ·SLCO1A2基因转录起始位点上游 2087bp和转录起始位点后 73bp片段的PCR扩增第39页
     ·双荧光素酶报告基因表达载体的构建第39-41页
   ·双荧光素酶报告基因表达载体的功能检测第41-43页
     ·带有不同长度片段表达载体的活性第41-42页
     ·突变体对SLCO1A2启动子活性的影响第42-43页
   ·TNFα 对NFκB核转位的影响第43-44页
   ·TNFα 中和抗体对SLCO1A2启动子活性的影响第44-45页
   ·NFκB与SLCO1A2基因启动子中NFκB靶位点结合的体内验证第45-47页
     ·细胞超声波破碎后染色质片段大小检测第45-46页
     ·PCR检测结合NFκB转录因子SLCO1A2启动子区NFκB靶位点的DNA片段第46-47页
4.结论与讨论第47-49页
   ·结论第47页
   ·讨论第47-49页
致谢第49-50页
参考文献第50-56页
附录第56-59页

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